187676. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teljesen védett dezoxiribodinukleotidok előállítására
187 676 2 um-szulfáttal, majd Whatman PSl papíron való szűréssel szárítjuk, és csökkentett nyomáson 30 9C-on bepároljuk. A maradékként kapott nyers terméket 40 ml acetonban oldjuk, és az oldatot 45% víz - 55% aceton elegyben feltöltött, 5 x 50 cm méretű, szilanizált szilikagél (Kieselgel 60, silanisiert, 70-230 mesh, Merck) oszlopra öntjük. Az anyagot az oszlop tetején 40 ml víz hozzáadásával kicsapjuk, majd a csapadékos elegyet az oszlopba engedjük. Az oszlopról az 5'-0-(4,4'-dimetoxi-trifenilmetil)-N4-benzoil-2'-dezoxi-citidint körülbelül 4800-5000 ml 45% víz - 55% aceton eleggyel mossuk le, és az 1. példában leírt módon körülbelül 6 g tiszta, újra felhasználható reagenst nyerünk vissza az eluátumból. A kívánt, C-G szekvenciát tartalmazó terméket körülbelül 4000-4200 ml 42% víz - 58% aceton eleggyel eluáljuk. Az oszlopkromatográfia menetét minden harmadik, körülbelül 50 ml-es frakció vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatával követjük. A vékonyrétegkromatográfiát szilanizált szilikagél rétegen (Kieselgel 60 F254, silanisiert, Merck 5747) végezzük, 4 : 6 arányú víz : aceton elegyben. Az eluátumot az 1. példában leírtak szerint feldolgozva 12,21 g színtelen, habszerű szilárd anyagot kapunk; kitermelés: 73,4%. Az anyag vékonyrétegkromatográfiásan homogén; Rr=0,76. Hasonló módon állítjuk elő az ebben a vegyületcsoportbán lehetséges további 15 dimert is. Ezek Xmax értékei az előző példákban megadott, hasonló szekvenciájú dimerekével gyakorlatilag azonosak. A kitermelések 68% és 74% között változnak. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletü, teljesen védett dezoxiribodinukleotidok nagynyomású folyadékkromatográfiával elemezve (oszlop: Serva S100; 5 p, 4,6 x 250 mm; eluálószer: 125:8:0,6 térfogatarányú diklór-metán : : izopropanol : víz elegy; detektálás 260 nm-en) legföljebb 1%, rendszerint azonban 0,5%-nál kisebb mennyiségű szennyezést tartalmaznak. A dimerekben jelenlévő két aszimmetriás foszforatom miatt a diasztereoizomerek elválása folytán tiszta anyag esetében általában három (ha két izomer csúcsa részben átfedi egymást, vagy csaknem egybeesik), de az esetek többségében négy különálló csúcs jelenik meg az eluciós profilokon. A szennyezésként esetleg jelenlévő mononukleozid származék a profil elején lényegesen kisebb retenciós idejű csúcsként jelentkezik. 5 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (I) általános képletű, teljesen védett dezoxiribonukleotidok előállítására - a képletben 10 R jelentése szubsztituálatlan vagy metoxicsoporttal szubsztituált trifenilmetil-csoport, előnyösen 4,4'-dimetoxi-trifenilmetil-csoport, Ar halogénezett fenilcsoportot jelent, és B1 és B2 egymástól függetlenül (a), (b), (c) vagy (d) általános 15 képletű csoportot jelent, amelyekben W jelentése szubsztituálatlan vagy egy vagy két 1-4 szénatomos alkilcsoporttal, 1-4 szénatomos alkoxicsoporttal, halogénatommal és/vagy nitrocsoporttal szubsztituált benzoilcsoport, Q 2-4 szénatomos alkanoil- 20 csoportot jelent, és X adott esetben halogénatommal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoportot vagy adott esetben halogénatommal szubsztituált 2-5 szénatomos alkenilcsoportot jelent -, azzal jellemezve, hogy 25 a,) 1 mólekvivalens (II) általános képletű dezoxiribonukleozid-3'-foszfát-triésztert vízmentes szerves oldószerben 1,0-1,1 mólekvivalens (III) általános képletű foszfoditriazoliddal reagáltatunk - a képletekben Ar és B1 jelentése a fenti -, és a kapott 30 (IV) általános képletű vegyületet - a képletben Ar és B1 jelentése a fenti - célszerűen magában a képződési reakcióelegyben, nukleofil katalizátor, előnyösen N-metil-imidazol jelenlétében 1,2-2,0 mólekvivalens (V) általános képletű 5'-0-védett dezoxi- 35 ribonukleoziddal - a képletben R és B2 jelentése a fenti - reagáltatjuk, majd a kapott (I) általános képletű vegyületet önmagukban ismert bepárlási és kromatográfiás műveletekkel elkülönítjük; vagy a2) 1 mólekvivalens (IV) általános képletű ve- 40 gyületet - a képletben Ar és B1 jelentése a fenti - nukleofil katalizátor, előnyösen N-metil-imidazol jelenlétében 1,2-2,0 mólekvivalens (V) általános képletű 5'-0-védett dezoxiribonukleoziddal - a képletben R és B2 jelentése a fenti - reagáltatunk, majd 45 a kapott (I) általános képletű vegyületet önmagukban ismert bepárlási és kromatográfiás műveletekkel elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 1 mólekvivalens (IV) általános képletű 50 vegyületre vonatkoztatva 1,5-1,8 mólekvivalens (V) általános képletű vegyületet használunk. 2 db ábra Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedő Üzem (877659/09) 87—2413 Dabasi Nyomda, Budapest—Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató 6
