187638. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új bisz- és poli-diszulfidok előállítására
1 187 638 2 Meglepő módon azt találtuk, hogy a találmány szerinti I általános képletű vegyületek immunstimuláns hatásúak. Közelebbről azt találtuk, hogy az említett vegyületek nemcsak az antigén érzékeny lymphoproliferációt, hanem az antitest termelést (elsőrendű és másodrendű immunválasz), valamint a celluláris immunválaszt is stimulálják, így növelik az immun-, különösen az antigén immunválaszt. A találmány szerinti vegyületek immunstimuláns hatását in vitro és in vivo standard vizsgálatokkal kimutathatjuk. így az I általános képletű vegyületek pozitív immunstimuláns hatását például a következő vizsgálati módszerekkel mutatjuk ki: In vitro: I. vizsgálat: Mishell-Dutton teszt - humorális válasz előidézése egér lépsejtek primer immunizálásával, szuszpenziós tenyészetben idegen eredetű vörösvérsejtekre [Science 153, 1004 (1966) és J. Exp. Med. 126, 423 (1967)]. Egér Iépsejteket 3-4 napig antigén (birka erythrocyták, SE) és vizsgálati anyag jelenlétében tenyésztünk. A sejteket összegyűjtjük, mossuk és friss antigénnel (SE) félszilárd agarlemezre visszük. 60 perc inkubálás után komplementumot adunk hozzá, és az inkubálást további 90 percig folytatjuk. Az első tenyészetben az egér lymphocitáknak az antigénre érzékennyé tétele antitest felszabadulást eredményez. A komplementum és az SE-re kiválasztott specifikus antitestek jelenlétében a bárány erythrocyták lízise következik be (folt képződik). A foltképző sejtek stimulálása az I általános képletű vegyületek 0,01-10,0 pg/ml koncentrációjánál figyelhető meg. II. vizsgálat: Az antigén-indukált immun interferonképzés stimulálása. Lymphocitákat [egér (Balb/c) lépsejtek] 5 napig sugárral kezelt egerekből (CBA* ) származó allogen lépsejtekkel együtt inkubálunk a fenti I. vizsgálatnak megfelelően, vizsgálandó anyag jelenlétében vagy távollétében. A felülúszót összegyűjtjük, és immun-interferon-szintre vizsgáljuk (L929 fibroblasttal fertőzött vírus védelme), a mért interferon egységeket egy ismert hatású humán leukocita interferon készítmény alkalmazásával standardizáljuk. A fenti módszerrel vizsgálva az I általános képletű vegyületek körülbelül 0,2-5,0 pg/ml koncentrációban stimulálják az immun interferonképzést. In vivo: III. vizsgálat: Késleltetett típusú túlérzékenységi reakció vizsgálata [Celluláris immunitás - Dietrich és munkatársai; Int. Arch. Allergy 38, 246 (1970)]. Egereket helyileg oly módon teszünk érzékennyé, hogy a hasukat antigénnel (oxazolannal) kenjük be a 0. napon. A vizsgálandó vegyületeket intraperitoneálisan vagy perorálisan adagoljuk a következő 5 nap mindegyikén, a kiváltó (antigén) adagot a 9. napon a jobb fülre kenjük. 24 óra múlva mikrovastagságmérővel mérjük a jobb és a kezeletlen bal fülen a bőrvastagságot. A két fül vastagságának átlagos különbségét tekintjük a reakció értékelésére szolgáló paraméternek. A késleltetett típusú túlérzékenységi reakció határozott stimulálása egészséges, felnőtt egerekben figyelhető meg, melyekben 5 napon át, napi 0,1-10 mg/kg dózisban i. p., vagy orálisan adagolt I általános képletű vegyület hatására normális immun-válasz alakul ki. IV. vizsgálat: A természetes falósejtek aktiválása. A vizsgálandó anyagot i. p. vagy p. o. adagoljuk csupasz (athymiás) egereknek [Balb/c vagy C57/ BL], 16 óra eltelte után a lépeket eltávolítjuk, és a Iépsejteket 4 óra hosszat krómmal jelzett „target”sejtekkel (YAK-1) együtt aktiváljuk. A természetes falósejtek elpusztítják a „target” sejteket, és a szabaddá vált jelzett króm a felülúszóba kerül. A felülúszót elválasztjuk, és a felszabadult króm mennyiségét szcintillációs számláló segítségével mérjük. A kezeletlen egérből származó lépsejtekkel inkubált „target” sejtekből felszabaduló króm mennyiségét használjuk kontrollként, és 100%-nak veszszük, és a vizsgálandó anyag adagolása után felszabaduló mennyiséget a kontroll százalékaként fejezzük ki. Az I általános képletű vegyületek 0,1-10,0 mg/kg mennyiségének adagolása után a króm felszabaduló mennyisége nő. Az I általános képletű vegyületek a fentiek szerint immunstimulánsként, például immunológiai adjuvánsként, szisztémás immunpotenciátorként és nem-specifikus gazda rezisztencia stimulátorként használhatók. Az I általános képletű vegyületek így olyan betegségek kezelésére vagy támogató kezelésére (azaz más specifikus vagy támogató terápiával kombinálva) javallhatók, melyekhez gátoit immunválasz, különösen gátolt humorális válasz és/vagy késleltetett típusú túlérzékenység járul, és olyan betegségek kezelésére, melyeknél az immunválasz fokozása egyébként is ajánlott. Az 1 általános képletű vegyületek különösen olyan halálos állapotok kezelésére vagy támogató kezelésére javallottak, melyeket spontán immunelégtelenségek idéznek elő, vagy amelyek idős betegeknél súlyos égési sérülést szenvedő vagy általánosan fertőzött betegeknél lépnek fel. Az I általános képletű vegyületek ajánlhatók vírusos betegségek (mint például herpes multiplex, fejlődő vaccinia és varicella multiplex), valamint Hodgkins betegség és más rosszindulatú daganatok kezelésére vagy támogató kezelésére. A fenti alkalmazásokra az ajánlott perorális dózis kb. 0,1 mg és 70 mg közötti mennyiség, egyszer adagolva a hatás javítására, például támogató kezelésnél, vagy naponta adagolva, ilyenkor előnyösen az osztott dózisokat napi 2-4 alkalommal, vagy nyújtott formában beadva. Az ajánlott perorális adagolásra alkalmas dózisegység a fentieknek megfelelően kb. 0,025 és 35 mg közötti mennyiségben tartalmazza az I általános képletű vegyületet, amikor a napi adag legfeljebb 70 mg I általános képletű vegyületet, amikor a napi adag legfeljebb 70 mg 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
