187631. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karbonsavamid-csoportot tartalmazó vegyületek, különösen peptidek előállítására
1 187 631 2 4. példa Z-Asp ( OBu'J-Phe—NH2 előállítása 1,6 g (0,01 mól) H-Phe—NH2-t 28 ml N-etilmorfolinnal együtt 0 °C hőmérsékleten feloldunk 20 ml dimetil-formamidban. A kapott oldathoz hűtés és keverés közben hozzáadunk 3,23 g (0,01 mól) Z Asp(OBu')—OH-ot és 4 g metil-etil-foszfinsavanhidridet. A kapott reakcióelegyet egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten hagyjuk állni, majd ismert módon etil-acetátos extrakcióval, vízzel, vizes nátrium-karbonát-oldattal és 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal való,mosással, az etilacetátos oldat nátrium-szulfát felett való szárításával és a végterméknek dietil-éterrel való kicsapásával dolgozzuk fel. Kitermelés: 4,0 g (85%), olvadáspont 162 °C [a]0 = 33,1 ° (c= 1, metanol). 5. példa Z~Gly-Thr(Bu')-Phe—OCfl3 előállítása 120 ml dimetil-szulfoxidban egymásután feloldunk 18,6 g (0,05 mól) H-Thr(Bu')-Phe—OCH3 • HCl-ot, 30 ml (0,238 mól) N-etil-morfolint és 10,4 g (0,05 mól) Z-Gly—OH-ot. A kapott reakcióelegyhez jéghütés és keverés közben nedvesség kizárásával részletekben hozzáadunk 40 g metiletil-foszfinsavanhidridet. A kapott reakcióelegyet 24 órán keresztül keverjük szobahőmérsékleten, majd 500 ml telített nátrium-karbonát-oldatba öntjük. Ennek során a kívánt termék kiválik. A reakcióelegyet dekantáljuk és a kivált csapadékot felvesszük etil-acetátban. Az etil-acetátos oldatot vízzel mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk vákuumban bepároljuk és a végterméket petroléterrel kicsapjuk. A kapott terméket egy éjszakán keresztül + 4°C hőmérsékleten kristályosítjuk. Kitermelés: 18,0 g (75%), olvadáspont 95 °C, [u]„ = +26° (c — 1, dimetil-formamid). 6. példa Z-Phe-ciklohexilamid előállítása 3,0 g (0,01 mól)Z-Phe—OH-ot, 1,0 g (0,01 mól, 1,2 ml) ciklohexilamint és 5 ml N-etil-morfolint feloldunk 30 ml dimetil-formamidban és a kapott oldathoz jéghütés és keverés közben hozzáadunk 4 g metíl-etil-foszfinsavanhidridet. Az exoterm reakcó befejeződése után (a hőmérséklet + 10 °C-ra emelkedik) a reakcióelegyet keverés közben hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni, majd az 1. példában megadottakkal azonos módon feldolgozzuk. Kitermelés: 3,3 g (85%), olvadáspont 167 °C, [u]„ = -2,8° (c = 1, dimetil-formamid). 7. példa Z Phe-Arg-Trp-Gly—OCH3 előállítása 2,26 g (0,005 mól) Z-Phe-Arg—OH-ot és 1,55 g (0,005 mól) H-Trp-Gly—OCHj ■ HCl-ot 5 ml N-etil-morfolinnal együtt 0 °C hőmérsékleten feloldunk 10 ml dimetil-formamidban. A kapott oldathoz ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzácsepegtetünk 2 g metil-etil-foszfinsavanhidridet. A kapott reakcióelegyet egy órán keresztül keverjük szobahőmérsékleten, majd 20 órán keresztül hagyjuk szobahőmérsékleten állni. A dimetil-formamidot vákuumban ledesztilláljuk, a visszamaradó anyagot 30 ml telített nátrium-karbonát-oldattal digeráljuk és a kapott szilárd anyagot vákuumban foszfor-pentoxid felett szárítjuk. Kitermelés: 3,0 g (90%), [a]„ = -28° (c=l, dimetil-formamid). 8. példa H-Plie - Arg- Trp-GI)—OCH3 ■ 2HCI előállítása 3 g benziloxikarbonil-tetrapeptidet feloldunk 200 ml metanolban, a reakcióedényből a levegőt nitrogénnel kiszorítjuk és a reakcióelegyhez hozzáadunk 1 g 10%-os Pd/bárium-szulfát katalizátort. A hidrogénezést ismert módon keverés közben hidrogéngáz átvezetésével végezzük. A reakcióelegy pH-értékét (a pH-értéket elektrometrikusan mérjük) 1 n metanolos sósav-oldat adagolásával 4,0 értéken tartjuk. A benziloxikarbonil-csoport a hidrogénezéssel 2,5 óra alatt hasad le, amit az 1 n sósav-oldat felhasználás és a szén-dioxid-fejlődés megszűnése jelez. A reakcióelegyböl a hidrogént nitrogénnel kiszorítjuk, nitrogénlégkörben a katalizátort kiszűrjük és az oldatot szobahőmérsékleten vákuumban szárazra pároljuk, majd a visszamaradó anyagot abszolút dietil-éterrel digeráljuk. Kitermelés erős vákuumban történő szárítás jtán: 2,5 g (gyakorlatilag kvantitatív), Md = +5,5° (c= I, jégecel). 8a példa A racemizálási fok meghatározása nagynyomású-folyadék kromatográfiával A folyadékkromatográf kloroform/metanol/víz/ hangyasav/ammónium-formiát elegyével (900 : 400 : 30 : 7 : 2,5) egyensúlyba hozott oszlopára (az oszlop mérete 0,4 x 25 cm, az oszlop töltete: SpherosilR XOA 600 NormatomR 5 pl) felviszszük 25 pl 0,4%,-os 8. példa szerinti peptidszármazék-oldatot. Az oszlopkromatogrammot a megadott oldószerelegynek az oszlopon való átvezetésével fejlesztjük ki, az oldószerelegy átvezetési sebessége 2 ml/perc 141 bar nyomáson. Az oszlopon elválasztott diasztereomer peptideket átáramlásos fotométerben a 280 nm-en mutatott abszorpció alapján határozzuk meg kvantitalíve. A fentiek szerint előállitott tetrapeptidészter-hidroklorid D-Arg-diasztomerjét a megadott feltételek között az elválasztás megkezdésétől számítva mintegy 10 perc alatt eluáljuk, az L-diasztereomer mintegy 15 perc múlva jelenik meg. A D-Arg-diasztereomer mennyisége a felvitt tetrapeptidészter-hidrokloridra számítva 2%. 5 IC 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
