187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására
1 187 503 2 Rf (7) = 0,2; Rr (4) = 0,65 c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp(OBzl)-IND 716 mg (1 mmól) GIp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 pentapeptid-hidrazidot oldunk 10 ml dimetilformamidban. Az oldatot — 10 °C-ra hűtjük, majd 0,7 ml 6 n sósavat és 75 mg nátrium-nitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 10 percen át - 5 °C-on keverjük, majd 438 mg (1 mmól) H-Asp(OBzl)-indolid trifluoracetát-sójának 0,7 ml trietil-aminnal és 2 ml dimetil-formamiddal készült oldatát adjuk hozzá. Szükség esetén a pH-t trietilaminnal 8-ra állítjuk. Az elegyet 1 órán át - 5 °C-on, 12 órán át 0 °C-on keverjük. A dimetilformamidot vákuumban eltávolítjuk, a maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük, etanollal és etil-acetáttal mossuk, majd dimetil-formamidban oldjuk, forrón csontszenezzük, és éter hozzáadásával kristályosítjuk. Hozam: 600 mg (60%). Összegképlet: CsjHjôNjoO,,Móltömeg: 1008,9 Op.: 172-174 °C Rr (9) = 0,7; Rf (10) = 0,4; Rf (1) = 0,35 d) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND 500 mg (0,5 mmól) Glp-His-Trp-Ser-Tyr- Asp(OBzl)-IND hexapeptid 0,5 ml dimetil-formamiddal és 30 ml 50%-os ecetsavoldattal készült oldatát 50 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében 2 órán keresztül hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot dimetil-formamidból éterrel kristályosítjuk. Hozam: 380 mg (83%). Összegképlet: C^HsoNjoOn Móltömeg: 918,9 Op.: 219-221 °C [a]“ = -37,7° (c = 1, dimetil-formamid) Rf (9) = 0,6; Rf (10) = 0,4; Rf(l) = 0,l e) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-IND ^-Leu_Arg-Pro-EA 42 mg (0,044 mmól) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp- IND hexapeptid 1 ml dimetil-formamiddal készült oldatát 0 °C-ra hűtjük, majd 7,8 pl diizopropilkarbodiimidet adunk hozzá, és keverjük, 10 perc elteltével 20 mg (0,044 mmól) H-Leu-Arg-Pro-EA hidroklorid trietil-aminnal semlegesített dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 12 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldószert vákuumban bepároljuk. A maradékot Sephadex G-25 oszlopon 0,2 n ecetsavban kromatografáljuk. A főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. Hozam: 28 mg (48%). összegképlet: C65H85N17013 Móltömeg: 1311 [a]p2 = 39,6° (c = 0,25, 25%-os ecetsav) R,. (13) = "Ö^ntf (9) = 0,75; Rf (5) = 0,7; Rf (10) = 0,5 8. példa Glp-H is- Trp-Ser- Tyr-A sp-ANI ^Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 a) BOC-Asp(0Bzl)-AN I 3,23 g (10 mmól) terc-butil-oxi-karboníl-aszparaginsav-béta-benzilésztert 50 ml etil-acetátban oldunk, 0 °C-ra hűtjük, és 0,96 g anilint és 2,26 g diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. 6 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldatot szűrjük, az etil-acetátos oldatot 10%-os citromsav oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és telített nátrium-klorid oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A bepárlás során kapott kristályokat petroléterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. Hozam: 4 g (96%). összegképlet: C22H2eN205 Móltömeg: 398,3 Op.: 105-106 °C [a]22 = -6° (c = 1, dimetil-formamid) Rr (11) = 0,8; Rf (12) = 0,95; Rr (8) = 0,4 b) BOC-Asp-ANI 3 g terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-bétabenzilészter-alfa-adnilid származékot 20 ml metanolban oldunk, és 300 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Ezután a katalizátort kiszűrjük, az oldószert vákuumban bepároljuk, és a maradékot etanolból vízzel kristályosítjuk. Hozam: 2,05 g (88%). összegképlet: C15H20N2O5 Móltömeg: 308,2 elm.: C 58,44; H 6,49; talált: C 58,6; H 6,56 Op.: 157-158 °C Md2 = ~ 12° (c = 1, dimetil-formamid) Rr (11) = 0,7; Rr (12) = 0,85; Rf (8) = 0,05 c) Glp-His-Trp-Ser- Tyr-Asp-ANI ^-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 A peptid szilárd fázisú szintézisét, a polimerről való hidrogén-fluoridos hasitást, valamint a nyers peptid kromatográfiás tisztítását a 4. példa c) pontja szerint végezzük el azzal a különbséggel, hogy 6-os számú aminosavként a 8. példa b) lépése szerint előállított vegyületet használjuk. így 82 mg (12,5%) tiszta terméket kaptunk. Összegképlet: C63H83N18Oi4 Móltömeg: 1315 [a]22 = -58,3° (c = 1, víz) Rf (9) = 0,5; Rf (10) = 0,2; Rr (12) = 0,8 Aminosavanalízis: NH3: 1,23; Arg: 0,95; Asp: 1,1; Glu: 1,08; Pro: 1,01; Gly: 1,00; Leu: 1,1; Tyr: 0,85; Ser: 0,99 9. példa Glp-His- Trp-Ser- Tyr-Asp- O Bzl Leu-Arg-Pro-EA a) BOC-Asp(OPFP)-OBzl 0,8 g (2,5 mmól) terc-butil-oxi-karboríil-aszparaginsav-a-benzilésztert oldunk 5 ml dimetil-formamidban, 0 °C-ra hűtjük az oldatot és keverés közben 0,45 g (2,5 mmól) pentafluor-fenolt és 0,52 g (2,5 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 60 percig 0 °C-on majd 24 órán át 20 °C-on keverjük. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot éterben oldjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet ismét bepároljuk. A visszamaradó olajat éter-petroléter oldószerelegyből —20 °C-on kristályosítjuk. Hozam: 960 mg (80%). 5 iq '5 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
