187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására
1 187 503 2 Összegképlet: C22H21N06F5 Móltömeg: 490,1 Op.: = 78-79 °C Rf (3) = 0,8 b) BOC-Asp-OBzl LLeu-Arg-Pro-EA 49 mg (0,1 mmól) H-Leu-Arg-Pro-EA dihidrokloridsóját oldjuk 1 ml dimetil-formamidban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, 14 pl (0,1 mmól trietil-amint adunk hozzá, majd 50 mg 0,1 mmól) terc-butil-oxikarbonil-aszparaginsav-a-benzilészter-p-pentafluor-fenilésztert adunk hozzá 1 ml dimetil-formamidban oldva. A reakcióelegyet 60 percig 0 'C-on, majd egy éjszakán át 20 ’C-on keverjük. A reakcióelegy bepárlása után a visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon 90 : 20 : 6 : 11 térfogat arányú etilacetát-piridin-ecetsav-víz elegyben kromatografáljuk. A megfelelő frakciókat begyűjtjük, vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradékot éterrel eldörzsöljük, fehér amorf anyagot kapunk. Hozam: 35 mg (50%). összegképlet: C35H56N808 Móltömeg: 716 Op.: = 124-125 °C Rr (1) = 0,52; Rf (9) = 0,74 c) H-Asp-OBzl ^-Leu-Arg-Pro-EA. 2 TFA 70 mg (0,1 mmól) BOC-Asp-OBzl ^-Leu- ArgPro-EA tetrapeptidet oldunk 1 ml trifluor-ecetsavban és 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot vákuumban bepároljuk, ezt háromszor megismételjük. Majd lúg felett szárítjuk. így 65 mg (77%) enyhén higroszkópos anyagot kapunk. összegképlet: C34H50N8O16F6 Móltömeg: 844 Op.: 114-116 °C Md2 = -47° (c = 1, metilalkohol) Rf (1) = 0,24; Rr (9) = 0,60 d) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-OBzl ^-Leu-Arg- Pro-EA. 2 AcOH 214 mg (0,28 mmól) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 pentapeptid-hidrazidot oldunk 5 ml dimetil-formamidban. Az oldatot — 10 °C-ra hűtjük és 0,2 ml 6 n sósav oldatot, majd 21 mg nátrium-nitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá. 15 percig —10 -15 °C-on keverjük, majd 230 mg (0,28 mmól) H-Asp-OBzl ^-Leu-Arg-Pro-EA di-trifluoracetátsóját és 0,16 ml trietil-amin 2 ml dimetil-formamiddal készült lehűtött oldatát adjuk a reakcióelegyhez. 1 órán át - 5 °C-on, 12 órán át 0 °C-on keverjük, majd a dimetilformamidot vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 10%-os ecetsavban Sephadex G-25 oszlopon frakcionáljuk. A főterméket tartalmazó frakciókat szilikagél oszlopon 90 : 20 : 6 : 24 térfogatarányú butanol-piridin-ecetsav-víz oldószerelegyben kromatografáljuk, majd a tiszta frakciókat bepároljuk, éterrel eldörzsöljük, szűrjük és deszt. vízből liofilizáljuk. Hozam: 200 mg (55%). Összegképlet: Ce4H84N16014 Móltömeg: 1301 Rf (5) = 0,60 Aminosavanalízis: Glu: 0,98; His: 1,00; Ser: 0,95; Tyr: 1,03; Asp: 0,96; Leu: 1,02; Pro: 0,95; Arg: 1,02. 10. példa Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-EA ^ Leu-Arg-Pro-Gyl-NH2 a) BOC-Asp(OBzl)-EA 3,23 g (10 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilésztert oldunk 100 ml dimetilformamidban. Az oldatot 0 °C-ra hütjük, keverjük és 1,35 mg (10 mmol) N-hidroxibenztriazolt és 2,26 g (11 mmol) diciklohexil-karbodimidet adunk hozzá. 15 percig 0 ’C-on keverjük a reakcióelegyet, majd lassan 0,45 g (10 mmól) etil-amin 1 ml dimetil-formamidban készült és lehűtött oldatát csepegtetjük hozzá. Ezután 1 órát még 0 °C-on, majd 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált csapadékot kiszűrjük, az anyalúgot bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és 10%-os hideg citromsav oldattal, telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és telített nátrium-klorid oldattal ismételten kirázzuk. Az etilacetátos fázist vízmentes nátriumszulfáton megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot éter-petroléter elegyéből - 20 °C-on kristályosítjuk. így 2 g (60%) fehér port kapunk. összegképlet: C18H26N205 Moltömeg: 350,2 [a]“ = -3,7° (c = 1, metanol) Op.: 57-60 °C Rf (7) = 0,77. b) BOC-Asp-EA 1,75 g (5 mmol) terc-butil-oxi-karbonil-aszpartilbéta-benzilészter-alfa-etilamidot 25 ml metanolban oldunk és 175 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátorjelenlétében 4 órán keresztül hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük és az oldatot vákuumban bepároljuk, majd exszikkátorban szárítjuk. így 1,25 g (98%) halványsárga olajat kapunk. Összegképlet: CnH20N2Os Moltömeg: 261.1 Md2 = ~ 6,2° (c = 1 > metanol) Rf (2) = 0,47; Rf (7) = 0,1; Rf (8) = 0.47; R, (6) = 0,1 c) Glp-His-Trp-Ser- Tyr-A sp-EA ^Lcu -Atg-Pro-GIy-NH2 A peptid szilárd fázison történő szinté/isét. a polimerről való hidrogén-fluoridos hasítási, valamint a nyers peptid kromatográfiás tisztítást a 4. példa c) pontja szerint végezzük, azzal a különbséggel, hogy 6-os számú aminosavként a 10. példa hi pontja szerint előállított vegyületet használjuk. 85 mg tiszta anyagot kapunk (13%). Összegképlet: C59H83N18Oi4 Moltömeg: I2o7 Md2 = 50’3° (c = I, víz) Op.:'175-177 °C Rr (5) = 0,35; Rf (11) = 0.2; R,<9) = 0.65; R. (13) = 0,15 Aminosavanalízis: Asp: 0.95; Ser 0 9V (111 1,05; Leu: 1,00; Tyr: 0,98; His: 1,09; Arg: 0,95. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
