187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására
1 187 503 2 Rf (8) = 0,9; Rf (10) = 0,9; Rf (7) = 0,75; Rr (11) = 0,95 b) BOC-Asp-CBA 1 g (2,65 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszpara- 5 ginsav-béta-benzilészter-alfa-ciklobutil-amidot oldunk 20 ml metanolban, és 100 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében 2 órán keresztül hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldatot vákuumban bepároljuk, és a maradékot 10 vizes etanolból kristályosítjuk. Hozam: 600 mg (79%). Összegképlet: C13H32N205 Móltömeg: 286,1 elm.: C 54,54; H 7,69; talált: C 53,9; H 7,68. Op.: 149-150 °C [a]“ = 1, metanol) Rf (8) = 0,2; Rf (10) = 0,75; Rf (7) = 0,05 c) Glp-His- Trp-Ser- Tyr-Asp-CBA ^~Leu-A rg-Pro-Gly-NH2 A peptid szilárd fázisú szintézisét és a polimerről történő hidrogén-fluoridos hasítást, valamint a nyers peptid kromatográfiás tisztítását a 4. példa c) 25 pontja szerint végezzük, azzal a különbséggel, hogy 6-os számú aminosavként az 5. példa b) pontja szerint előállított vegyületet használjuk. így 68 mg (10,5%) tiszta pepiidet kapunk. Összegképlet: C61H85Ni8014 Móltömeg: 129130 [a]22 = -44,88 (c = 1, víz) Rf (11) = 0,2; Rf (9) = 0,7; Rf (13) = 0,2 Rf (5) = 0,4 Aminosavanalízis: Glu: 10,5; His: 0,96; Ser: 0,94; Tyr: 0,98; Asp: 1,07; Leu: 1,02: Pro: 0,96; Gly: 1,0035 6. példa 1-------------r 40 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-PIR LLeu-Arg-Pro-Gly-NH2 a) BOC-Asp(OBzl)-PIR 3,2 g (10 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszpara-45 ginsav-béta-benzilésztert oldunk 5 ml etil-acetátban, és 0 °C-on 1,35 g N-hidroxi-benztriazolt, 2,26 g diciklohexil-karbodiimidet és 0,8 ml pirrolidin 2 ml etil-acetátos oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten ke- 5Q verjük, majd 10%-os citromsav oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és telített nátrium-klorid oldattal kirázzuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot éterben oldjuk,55 szűrjük és ismét bepároljuk. így 3,4 g (90%) olajat kapunk. Összegképlet: C2oH28N205 Móltömeg: 376,2 Md2 = _8454° (c = 1, metanol) Rf (7) = 0,75; Rf (4) = 0,95; Rr (8) = 0,85; Rf60 (6) = 0,8 b) BOC-Asp-PIR 3 g (8 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilészter-alfa-pirrolidin 30 ml méta- ^ no Hal készült oldatát 250 mg 10%-os palládiumcsontszén katalizátoPjelenlétében 2 órán keresztül hidrogénezzük, majd a katalizátort kiszűrjük, és az oldatot bepároljuk. A maradék olajat kénsav felett szárítjuk. Hozam: 2,1 g (92%). összegképlet: C13H22N2Ó5 Móltömeg: 286,2 Op.: 124-125 °C [a]22 = -3^9° (c = 1, metanol) Rf (8) = 0,3; R, (7) = 0,2 c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-PIR *-Leu-Arg-Pro- Gly-NH2 A peptid szilárd fázisú szintézisét, a polimerről 15 történő hidrogén-fluoridos hasítást, valamint a nyers peptid kromatográfiás tisztítását a 4. példa c) pontja szerint végezzük el, azzal a különbséggel, hogy 6-os aminosavként a 6. példa b) pontja szerint előállított vegyületet használjuk. így 78 mg (12%) 20 tiszta peptidet kapunk. összegképlet: C6iH85N18014 Móltömeg: 1293 [a]22 = -53,2 (c = 1, víz) Rf (13) = 0,15; Rf (9) = 0,6; Rf (11) = 0,2; Rf (5) = 0,4 Aminosavanalízis: Glu: 0,97; His: 1,01; Ser: 0,94; Tyr: 1,03; Asp: 1,05; Leu. 1,00; Pro: 0,94 7. példa Glp-His- Trp-Ser- Tyr-Asp-IND ^Leu-Arg-Pro-EA a) BOC-Asp(OBzl)-IND 3,23 g (10 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilésztert oldunk 50 ml etilacetátban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben 2,3 g diciklohexil-karbodiimidet és 1,19 g indolint adunk hozzá. A reakcióelegyet éjjelen át szobahőmérsékleten hagyjuk keveredni; másnap szűrjük, a szűrletet háromszor 10% citromsavval, háromszor telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és háromszor telített nátrium-klorid oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd bepároljuk. A visszamaradó olajat etanolból vízzel kristályosítjuk. Hozam: 3,7 g (89%). Összegképlet: C24H28N2Ö5 Móltömeg: 424,1 Op.: 75-76 °C Md2 = ~ 70,9° (c = 1, etanol) Rr(7) = 0,9. b) H-Asp(OBzl)-IND.TFA 800 mg (1,9 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilészter-alfa-indolint oldunk 5 ml trifluor-ecetsavban, és 15 percen át szobahőmérsékleten keverjük. A trifluor-ecetsavat vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk, majd etanolból éterrel kristályosítjuk. Hozam: 780 mg (94%). Összegképlet: C24H21N2Ö5F3 Móltömeg: 438,1 Op.: 114-115 °C Md2 = “5,8° (c = 1, metanol) 7
