187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására
1 187 503 2 Összegképlet: C57H79NI80I4 Móltömeg: 1239 [a]22 =-55,5° (c = 1, víz) R,(5) = 0,35; R^l 1) = 0,15; R,(9) = 0,65; R,(13) = 0,15 5 Aminosavanalízis: Glu: 0,96; His: 1,04; Ser: 0,93; Tyr: 1,02; Leu: 1,02; Pro: 0,94; Gly: 1,00; Asp: 1,1. 4. példa Glp-His-Trp-Ser- Tyr-Asp-FBA Leu-Arg-Pro-Gly-NHZ a) BOC-Asp(OBzl)-a-[2-(4-klór-fenil)-izobutil- 15 amid] 5 g (15 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilésztert 100 ml etil-acetátban oldunk, 0 “C-ra hűtjük, és 2,1 g N-hidroxi-benztriazolt, 3,75 g diciklohexil-karbodiimidet és 3,5 g 2-(4- 20 klór-fenil)-izobutil-amin 20 ml dimetil-formamidban készült oldatát adjuk a kevert reakcióelegyhez. Az elegyet 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldatot megszűrjük. Az etil-acetátos oldatot 10%-os citromsav oldattal, telített nátrium- 25 hidrogén-karbonát oldattal, majd telített nátriumklorid oldattal kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradék színtelen olaj lassan kristályosodik. A kristályokat éter és petroléter elegyével mossuk, 30 majd szárítjuk. Hozam: 5,5 g (75%). összegképlet: C26H33N205C1 Móltömeg: 488,2 Op.: 60-61 °C [a]22 = -12’2° (c = metanol) ^ R({7) = 0,75; R[(8) = 0,6 b) BOC-Asp-FBA 2,3 g (4,7 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilészter-a-[2-(4-klór-fenil)-izobutil-amid] 30 ml metanolos oldatát 200 mg 10%-os 40 palládium-csontszén katalizátor jelenlétében 2 órán keresztül hidrogénezzük, majd a katalizátort kiszűrjük, és az oldószert vákuumban bepároljuk. A maradékot éterben eldörzsöljük, és metanolból éterrel kristályosítjuk. 45 Hozam: 1,5 g (87%). Összegképlet: C19H28N2Ö5 Móltömeg: 364,2 elm.: C 62,63; H 7,69; talált: C 62,3; H 7,58. Op.: = 94-96 °C 50 Md2 - - 19° (c = 1 metanol) Rr (3) = 0,2; Rf (2) = 0,3; Rf (7) = 0,15; Rr (8) = 0,8; Rf (10) = 0,15 55 c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-FBA LLeu-Arg- Pro-Gly-NH2 1 g (0,5 mmól) benzhidril-amin polimert automatikus peptidszintetizátor (Beckman 990B) reakcióedényébe helyezünk, és 4 órán keresztül 30 ml di-60 klór-metánban kevertetjük. A védett aminosavszármazékokat a megfelelő sorrendben a következő ( 1 10) lépések ciklikus ismétlésével kapcsoljuk a polimerhez. 1. mosás 30 ml diklórmetánnal 3x3 perc 2. mosás 30 ml trifluor-ecetsav és diklór-metán 1 : 2 arányú elegyével 5 és 25 perc 3. mosás 30 ml diklór-metánnal 3x3 perc 4. mosás 30 ml etanollal 3x3 perc 5. mosás 30 ml kloroformmal 3x3 perc 6. mosás 30 ml trietil-amin és kloroform 1:9 arányú elegyével 2x10 perc 7. mosás 30 ml kloroformmal 3x3 perc, 8. mosás 30 ml diklór-metánnal 3x3 perc 9. 1,5 mmól BOC-aminosavszármazék és 1,5 mmól diizopropil-karbodiimid inkubálása 30 ml diklór-metánban 120 perc 10. mosás 30 ml diklór-metánnal 3x3 perc A védett aminosavszármazékok a következők: BOC-Gly-OH, BOC-Pro-OH, BOC-Arg(Tos)-OH, BOC-Leu-OH, BOC-Asp-FBA, BOC-Tyr(BzI)OH, BOC-Ser(Bzl)-OH, BOC-Trp-OH, BOCHis(Tos)-OH és Glp. Az összes aminosav kapcsolása után a kész peptidpolimer gyantát vákuumban megszárítjuk, és 50 ml cseppfolyós hidrogén-fluoriddal 6 ml anizol jelenlétében 45 percen át 0 °C-on keverjük. A hidrogén-fluoridot vízmentes nitrogén gázáramban eltávolítjuk, a maradékot éterrel kicsapjuk és szűrjük. A kiszűrt anyagot 50%-os ecetsavban szuszpendáljuk, szűrjük, majd a szürletet vákuumban bepároljuk. A maradékot 50%-os ecetsavoldatban Sephadex G-25 oszlopon engedjük át. A tiszta főfrakciót szilikagél oszlopon a 10. oldószereleggyel kromatografáljuk. A tiszta anyagot tartalmazó frakciókat bepároljuk és liofilizáljuk. Hozam: 70 mg(10%). Összegképlet: C67H91N18Ö14 Móltömeg: 1371 [a]p2 = -56,4 °C (c = 1, víz) Rr (13) = 0,25; Rr (9) = 0,7; Rr (11) = 0,2; Rr (5) = 0,5 Aminosavanalízis: Glu: 0,97; His: 1,05; Ser: 0,94; Tyr: 1,02; Asp: 1,02; Leu: 1,01; Pro: 0,95; Gly: 1,00 5. példa Glp-His- Trp-Ser- Tyr-Asp-CBA ^-Leu-Arg-Pro- Gly-NH2 a) BOC-Asp(OBzl)-CBA A 3. példa a) pontja szerint előállított 2,4 g (5 mmól) terc.-butil-oxi-karbonil-aszparaginsavbéta-benzilészter-alfa-pentafluor-fenilésztert oldunk 20 ml etil-acetátban, 0 °C-ra hűtjük, és 0,42 ml (5 mmól) ciklobutil-amin 2 ml etil-acetátta! készült lehűtött oldatát csepegtetjük hozzá'. Ezután a reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 10%-os citromsav oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és telített nátriumklorid oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékot éterből petroléterrel kristályosítjuk. Hozam: 1,16 g (89%). Összegképlet: C20H28N2O5 Móltömeg: 376.2 Op.: 84-86 °C [a]p2 = -5,7° (c = 1, metanol) 6
