187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására

1

.187 503

2

szamaradé anyagot éterrel eldörzsöljük, majd szűrjük. Az így kapott kb. 780 mg nyers terméket szilikagél oszlopon 4:1:1 arányú butanol-ecetsav-viz elegyben kromatográfiásan tisztítjuk. A megfelelő frakciókat begyűjtjük, vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradék éteres eldörzsölésével 470 mg (64%) fehér port kapunk.

Összegképlet: C32H57N10O9 Móltömeg: 725,6

[a]“ = -77,2° (c = =1, metanol)

10

Op. = 132-133 °C

R,(2) = 0,4; R,(9) = 0,85; R,(10) = 0,55

1---------e) BOC-Asp-DEA

1

Leu-Arg-Pro-EA. AcOH

5

730 mg (1 mmol) BOC-Asp-DEA -Leu- Arg(N02)-Pro-EA tetrapeptidet oldunk 20 ml 50%-os ecetsavban, és 100 mg 10% palládiumcsontszén katalizátor jelenlétében 3 órán keresztül hidrogénezzük. A reakcióelegy bepárlása után kromatográfiásan egységes olajos termékhez jutunk, összegképlet: C34H63N909 Móltömeg: 741,6 R,<2) = 0,05 R,(9) = 0,65; R,(l) = 0,6

20

0 H-Asp-DEA ^Leu-Arg-Pro-EA. 2TFA 25

740 mg (1 mmol) BOC-Asp-DEA Leu-Arg- Pro-EA tetrapeptidet oldunk 10 ml trifluor-ecetsavban, és 15 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradé-30 kot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, majd lúg felett szárítjuk. így 780 mg (96%) gyengén higroszkópos anyagot kapunk.

Összegképlet: C31H5309N9F6 Móltömeg: 809,2 [aß2 = -40,6° (c = 1, víz) 35

Rr( 11) = 0,2; R,(5) = 0,4

g ) Glp-His- Trp-Ser- Tyr-Asp-DEA ^-Leu-Arg-Pro-EA. 2 AcOH 10

286 mg (0,4 mmol) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 penta-peptid-hidrazidot oldunk 25 ml dimetilformamidban. Az oldatot - 10 °C-ra hűtjük, és keverjük közben 0,27 ml 6 n sósavat, majd 30,2 mg nátrium-nitrit tömény vizes oldatát csepegtetjük 45 hozzá. 5 perc elteltével hozzáadjuk 353 mg

(0,4 mmól) H-Asp-DEA ^-Leu-Arg-Pro-EA tetrapeptid trifluoracetát-sójának 1 ml dimetil-formamidban 0,27 ml trietil-aminnal készült - 10 °C-os50 oldatát. A reakcióelegyet szükség esetén trietilaminnal semlegesre állítjuk, majd 1 órán át -5 °C-on, 1 órán át 0 °C-on, 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük.

A dimetil-formamidot vákuumban eltávolítjuk, 55 a maradékot szilikagél oszlopon 30 : 20 : 6 : 11 arányú etilacetát-piridin-ecetsav-víz eleggyel kromatografáljuk. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük, vákuumban bepároljuk, éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. így 290 mg (50%) fehét port ka-60 punk.

összegképlet: C65H95N17017 Móltömeg: 1385

Op.: 180-181 °C

[aß2 = -64,2° (c = 1, metanol)

R,(12) = 0,85; R,(5) = 0,35; R,(ll) = 0,25 Aminosavanalízis: Asp: 1,0; Ser: 0,99; Glu: 1,01; Leu: 1,10; Tyr: 1,00; His: 0,92; Arg: 0,98;

3. példa

Glp-His-Trp-Ser- Tyr- Asp-NH\ ^-Leu-A rg-Pro-Gly-NH2

a) BOC-Asp(OBzl)-OPFP

3,23 g (10 mmol) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzil-észtert oldunk 50 ml etilacetátban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben 1,84 g (10 mmol) pentafluor-fenolt és 2,26 g (11 mmol) diciklo-hexil-karbodiimidet adunk hozzá. 30 percen át 0 °C-on, majd 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Szűrés után az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot 15 ml éterben oldjuk, és 15 ml petroléter hozzáadásával -20 °C-on kristályosítjuk. Hozam: 3,75 g (70%).

Összegképlet: C22H20N1O6F5 Móltömeg: 489,3

Op.: 84 °C

[aß2 =| - 18,1 (c = 1, etil-acetát)

Rf(7) = 0,9; Rf (4) = 0,95

b) BOC-Asp (OBzl)-NH2

970 mg (2 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilészter-alfa-pentafluor-fenilészter 10 ml metanolos oldatához 10 ml 0 °C-on ammóniával telített metanolt adunk, és 30 percen keresztül 0 °C-on keverjük. Ezután az oldószert vákuumban bepároljuk, a maradékot metanol és éter elegyéből kristályosítjuk.

Összegképlet: C,6H22N205 Móltömeg: 322,1

Elm.: C 59,62%; H 6,83%; N 8,69%;

Talált: C 59,2%; H 6,98%; N 8,8%.

Op.: 159-161 °C

[aß2 = + 1,1 ° (c = 1, metanol)

W = 0,5; Rf(8) = 0,75; R^) = 0,9;

R,<6) = 0,95

c) BOC-Asp-NH2

480 mg (1,5 mmól) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilészter-alfa-amidot 10 ml metanolban oldunk, és 1 órán át 50 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot vizes etanolban kristályosítjuk. Hozam: 246 mg (93%).

Összegképlet: C9H,6N205 Móltömeg: 232,2

Op.: 145-146 °C

faß2 = - 2,2° (c = 1 metanol)

R(<7) = 0,05; R,(8) = 0,2; R^4) = 0,3;

R^6) = 0,1

d) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-NH 2 Llcu.

Arg-Pro-Gly-NH2

A peptid szilárd fázison történő szintézisét, a polimerről való hidrogén-fluoridos hasítást, valamint a nyers peptid kromatográfiás tisztítását a 4. példa c) pontja szerint végezzük, azzal a különbséggel, hogy 6-os számú aminosavként a 3. példa c) pontja szerint előállitott vegyületet használjuk. Végül 72 mg (12%) tiszta anyagot kapunk.

5