187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására

1

187 503

2

1. példa

(ilp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-OMe LLeu-Arg-Pro~EA

a) Z-Asp-OMe L Leu-Arg(N02)-Pro-EA

537 mg (1 mmól) H-Leu-Arg(N02)-Pro-EA hid- 5 robromidsóját 10 ml dimetil-formamidban oldjuk, majd 0 °C-on 447 mg 1 mmól Z-Asp(OPFP) -OMe származékot adunk hozzá. Ezután keverés közben a reakcióelegye pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk, majd 6 óra elteltével az oldatot vákuumban bepá-10 roljuk. A maradékot először éterrel, majd vízzel eldörzsöljük, szűrjük, végül metanolból éter hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, levegőn szárítjuk. így 440 mg (62%) fehér, amorf anyagot kapunk. 15

Összegképlet: C3,H4gN9O10 Moltömeg: 719,6 Op.: 182-184 °C

[a]p2 = -58,4° (c = 1, metanol)

R((2) = 0,5; Rf (9) = 0,85; Rf (12) = 0,9 20

b) H-Asp-OMe ^-Leu-Arg-Pro-EA.2 AcOH

400 mg 0,56 mmól Z-Asp-OMe Leu- Arg(N02)-Pro-EA tetrapeptidet oldunk 20 ml25 50%-os ecetsavban, és 50 mg 10%-os palládiumcsontszén katalizátor jelenlétében 4 órán át hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, az ecetsavat vákuumban eltávolítjuk, majd a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és vákuumban szárítjuk. Ho-30 zam: 360 mg (97%).

Összegképlet: C28H52N8O10 Moltömeg: 660,5 Rf(l) = 0,15; Rj(9) = 0,6; R,(10) = 0,25;

Rr (5) = 0,45 35

c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-OMe LLeu-Arg-Pro-EA

716 mg (1 mmól) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 pentapeptid-hidrazidot oldunk 20 ml dimetilformamidban majd ezt az oldatot - 10 °C-ra hűt-4 jük, és 0,7 ml 6 n sósav oldatot, majd 75 mg nátrium-nitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá. 10 percig -5 °C-on keverjük majd 660 mg (1 mmól)

H-Asp-OMe ^-Leu-Arg-Pro-EA diacetát-sóját45 és 0,7 ml trietil-amin 5 ml dimetil-formamiddal készült lehűtött oldatát adjuk a reakcióelegyhez. Szükség esetén az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk. 1 órán át - 5 °C-on, 12 órán át 0 °C-on keverjük, majd a dimetil-formamidot vákuumban50 eltávolítjuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, ezután 0,2 N ecetsavban Sephadex G-25 oszlopon frakcionáljuk. A főterméket tartalmazó frakciókat középnyomású fordított fázisú C18 (Whatman, LRP-1) szilikagél oszlopon 30% vizes55 metanolban kromatografáljuk, majd a tiszta frakciókat liofilizáljuk. Hozam: 712 mg (58%). Összegképlet: C58H8oNi6014 Móltömeg: 1225 [a]22 = -53,4° (c = 1, víz) ^

R|{5) = 0,5; R((10) = 0,15; R,<9) = 0,7 Aminosavanalízis: Glu: 1,02; His: 0,97; Ser: 0,95; Tyr: 1,01; Asp: 1,07; Leu: 1,00; Pro: 0,93;

2. példa

Glp-His- Trp-Ser- Tyr-Asp-DEA ^Leu-Arg-Pro-EA

a) Boc-Asp-(OBzl)-DEA

3,23 g (10 mmol) terc-butil-oxi-karbonil-aszparaginsav-béta-benzilésztert oldunk 100 ml 0 °C-os dimetil-formamidban. Az oldathoz 1,35 g (10 mmol) N-hidroxi-benztriazolt és 2,26 g (11 mmol) diciklohexil-karbodiimidet adunk. 15 percen keresztül 0 °C-on keverjük majd lassan 1,0 ml (9,73 g; 10 mmol) dietil-amin 20 ml etil-acetátban készült oldatát csepegtetjük a kevert reakcióelegyhez. Ezután 30 percig még 0 °C-on, majd 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált csapadékot kiszűrjük, az anyalúgot bepárlás után etil-acetátban felvesszük és 10%-os hideg citromsav oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és telített nátrium-klorid oldattal ismételten kirázzuk. Az etil-acetátos fázist vízmentes nátrium-szulfáton megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. 3,6 g (95%) halványsárga olajat kapunk.

Összegképlet: C20H30N2O5 Móltömeg: 378,2

[a]p2 = -58,4° (c = 1, metanol)

Rf(4) = 0,95; Rf(6) = 0,95; R,<7) = 0,75

b) BOC-Asp-DEA

3.8 g (10 mmol) terc.-butiloxi-karbonil-aszpartilbéta-benzilészter-alfa-dietii-amidot oldunk 50 ml metanolban, és 300 mg 10%-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében 2 órán keresztül hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk és exszikkátorban szárítjuk. így 2,8 g (100%) halványsárga habos anyagot kapunk.

Összegképlet: C13H2SN205 Móltömeg: 289,1 Md2 = -60,1° (c = 1, metanol)

R|{4) = 0,7; R,(6) = 0,9; R,(8) = 0,8

c) BOC-Asp (OPFP)-DEA

2.9 g (10 mmol) terc-butiloxi-karbonil-aszparaginsav-alfa-dietil-amidot oldunk 100 ml 0 °C-os etil-acetátban keverés közben, majd 1,84 g (10 mmol) pentafluor-fenolt és 2,26 g (11 mmol) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 30 percig 0 °C-on, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált csapadék kiszűrése után az etil-acetátos oldatot bepároljuk, a maradékot petroléterben felvesszük, a kivált csapadékot ismét kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. Szárítás után 4,4 g (99%) színtelen olajat kapunk.

Összegképlet: C19H24N2OsF5 Móltömeg: 455,1 [a]22 = -75,0° (c = 1, metanol)

Rf(8) = 0,95; R,(6) = 0,9; R,{4) = 0,75;

Ri(7) = 0,8

d) BOC-Asp-DEA Leu-Arg (N02)-Pro-EA 536 g (1 mmol) H-Leu-Arg(N02)-Pro-etil-amid

hidrobromid-sóját oldjuk 5 ml dimetil-formamidban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, 0,14 ml (1 mmol) trietil-amint adunk hozzá, majd 453 mg (l mmol) terc-butil-oxi-karbonil-aszpartil-alfa-dietil-amidbéta-pentafluor-fenilésztert adunk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük, miközben a pH-t trietil-aminnal időnként semlegesre állítjuk. A reakcióelegy bepárlása után a visz-4