187503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-aszpartil-csoportot tartalmazó gonadoliberin-származékok előállítására
1 187 503 2 Arg(N02)-Pro-Y - amely képletben Y jelentése a fenti - tri- vagy tetrapeptidet az aminocsoportján terc-butiloxikarbonil vagy benziloxikarbonil védőcsoporttal ellátott (VI) általános képletü - amely képletben E Z-Asp-X VI Z jelentése terc-butil-oxi-karbonil- vagy benziloxikarbonilcsoport, X és E jelentése a fenti - aszparaginsavszármazékokkal acilezzük, majd a kapott vegyületről a védőcsoportokat eltávolítjuk. A b) eljárásban a (III) képletü nexapeptidet célszerűen úgy állítjuk elő, hogy a (VII) képletü - amely 0-R3 I H-Asp-X VII képletben X jelentése a fenti, R3 jelentése hidrogén, metil-, benzil- vagy terc-butil-csoport - aszparaginsav származékot a Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 peptapeptid-aziddal acilezzük. A c) eljárásban alkalmazott szilárdfázisú peptidszintézis módszerek az irodalomban ismertek (J. M. Stewart: „Solid Phase Peptide Synthesis”, Freeman and Co., San Francisco, 1969.) Az automatikusan vezérelt szilárd fázisú szintézismódszerrel (D. Coy et al., Biochemistry 13, 323 (1974), D. Coy et al., J. Med. Chem. 19, 323 (1976)) számos gonadoliberinanalógot állítottak már elő; a c) eljárás abban különbözik az ismertektől, hogy 6-os aminosavként (VIII) általános képletü - ahol X jelentése a fenti, R3 jelentése hidrogénatom, BOC-Asp-X VIII ! o-r3 p-nitro-fenilcsoport vagy pentafluor-fenilcsoport - aminosavszármazékot használunk. A molekula többi aminosavoldalláncának átmeneti védelmére olyan csoportokat használunk, amelyek hidrogénfluorid hatására utólag eltávolíthatók; például az argininnál és a hisztidinnél p-toluol-szulfonil-, a szerin és a tirozin esetében benzil-csoportokat. A képződött nona-, illetve dekapeptidamidot kívánt esetben gyógyászatilag elfogadható savval reagáltatva savaddíciós sóvá alakítjuk, vagy kívánt esetben a savaddíciós sóból bázissal reagáltatva felszabadítjuk a szabad bázist, és kívánt esetben a kapott nona-, illetve dekapeptidamidot valamilyen savval sóvá alakítjuk. A találmány tárgya továbbá eljárás az (I) általános képletü vegyületek gyógyászati kompozíciókká való előállítására. Ezt célszerűen úgy végezzük, hogy valamely (I) általános képletü vegyületet vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó és/vagy vivőanyagokkal összekeverve tabletta, drazsé, kapszula, kúp, injekciós oldat, orrpermet stb. alakban gyógyászati készítménnyé alakítjuk. Az (I) általános képletü vegyületek egy előnyös képviselője a (IX) képletü vegyület, amely androgenizált kísérleti I-------------1 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Asp-DEA *— Leu-Arg-Pro- EA IX patkányokon nagyobb hatékonysággal váltott ki ovulációt, mint a natív LH-RH, annak ellenére, hogy LH-felszabadító hatását tekintve a (IX) képletü vegyület egy nagyságrenddel gyengébb hatást mutatott, mint a natív LH-RH. Egy másik kísérletben a (IX) képletü vegyület 20 pg/kg mennyiségének hatására kecsege és harcsa anyahalak 80%-ban leadták az ikrájukat, míg a kontroll csoportnál, amely ugyanolyan körülmények között az irodalomban szuperaktívnak ismert D-Phe6, desGly10-LH-RH-etilamidot kapott, nem következett be ovuláció. A (IX) képletü vegyület 100 pg mennyisége az inszeminálással egy időben im. adva 25-30%-kal megnövelte a szarvasmarhák vemhesülési arányát, ugyanakkor a natív LH-RH ilyen dózisban nem bizonyult hatékonynak. A (IX) képletü vegyület egyszeri 10 pg-os menynyiségével kék- és ezüstrókák szezonon kívüli ivarzását tudtuk kiváltani, ugyanakkor a natív LH-RH ilyenkor is hatástalannak mutatkozott. A találmány szerinti eljárással előállítható másik vegyület, a béta-Asp-alfa-anilid6 -LH-RH pulykakakasok ondó- és tesztoszteron termelését sokkal jobban és tartósabban fokozta, mint pl. a struktúranalóg D-Phe6-LHRH. Ugyanezen vegyület nőstény pulykák kotlási idejét lényegesen csökkentette, míg a natív LH-RH hatástalan volt. A fenti példák azt bizonyítják, hogy a találmány szerinti eljárással előállított új gonadoliberin analógok nagy hatással vannak a gerincesek szaporodási folyamataira. Előnyös alkalmazásukat az állattenyésztésben számos kísérlet igazolta. Az (I) általános képletü vegyületek jelentős előnye az eddig ismert nagyhatású gonadoliberin analógokkal szemben, hogy kizárólag L-konfigurációjú aminosavakból épülnek fel, ugyanakkor a biológiai kísérletekben vizsgált új származékok ovulációt kiváltó és tesztoszteront felszabadító hatása jobb volt, mint a 6-os helyzetben glicint vagy D-konfigurációjú aminosavat tartalmazó ún. szuperaktív gonadoliberin-származékoké. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példákban a vékonyréteg-kromatográfiás Rr értékeket Kieselgel DC, Alufolien/Merck lemezeken az alábbi oldószerelegyekben határoztuk meg: 1. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 60:20:6:11 2. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 120:20:6:11 3. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 240:20:6:11 4. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 480:20:6:11 5. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 30:20:6:11 6. aceton-klorofom 1:15 7. aceton-toluol 1:1 8. ecetsav-benzol 1:7 9. n-butanol-ecetsav-etilacetát-víz 1:1:1:1 10. n-butanol-ecetsav-víz 4:1:1 11. n-butanol-ecetsav-víz 4:1:5 (felső fázis) 12. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 5:5:1:3 13. butanol-piridin-ecetsav-víz 60:20:6:11 Az olvadáspontokat °C-ban adjuk meg, az értékek nem korrigáltak. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
