187499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pterokarpán vegyületek izolálására, valamint eljárás az e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

187 499

10

15

20

25

*H—NMR:

1,83 (3H, d, 1 Hz, 3'—CHj);

3.40 (2H, br, d, 7 Hz, CT)T

3,61 (2H, d, d, 11,7 Hz, c 6);

3,90 (2H, — 0CH20—);

3,99 (2H, br, s, —CH2—OH);

4,28 (1H, dd, 11,5TKTC6 a);

5.45 (1H, br, t, 7 Hz, C 2');

5.45 (1H, d, 7 Hz, C 11a);

6.41 (1H, s, C 10);

6.52 (1H, d, 9 Hz, C 2);

6,70 (1H, s, C 7);

7,23 (1H, d, 9 Hz, C 1) ppm.

,3C—NMR:

13,74 (3'—CHj); 21,88 (C 1'); 40,16 (C 6a);

66,72 (C 6); 68,72 (—CHj—OH); 79,10 (C Ha);

93,77 (C 10); 104,73 (C 7); 109,6 (C 2);

112,63 (C 4 vagy C la); 115,01 (C 4 vagy C la);

118,04 (C 6b); 123,49 (C 2'); 129,15 (C 1);

136.07 (C 3'); 141,67 (C 8); 148,06 (C 9);

154,20 (C 10a vagy C 4a); 154,20 (C 10a vagy

C 4a);

155.08 (C 3) ppm.

MS (18 eV):

M+ = 368, 50%

m/e = 350,100%; 335,95% 335,95%; 176, 65%;

161, 90%.

A nagynyomású folyadékkromatografálás során nyert második frakcióból körülbelül 10 mg olajos 30 keveréket kapunk. Ezt a frakciót, amelyet az előzőekben leírt módon a nagynyomású folyadékkromatografálás során az éteres fázisból nyerünk, a következő módon kezeljük, hogy megkapjuk a cabenegrin II vegyületet. 35

A keveréket további nagynyomású folyadékkromatografálásnak vetjük alá, (p-Bondapack C18 hordozó és metanol: acetonitril:víz:n-propanol 71:71:59:2 eluens alkalmazásával. A (II) képletű vegyületet gyakorlatilag tiszta - 95-100%-os tiszta- 40 ságú - kristályos formában kapjuk, a hozam körülbelül 1 mg. A vegyület szerkezetét a következő fizikai adatok jellemzik, az MS értékek szerint a vegyület C21H2206 összegképletű.

■H—NMR: 45

0,69 (3H, d, 5,8 Hz, 3'—CH3);

2.50 (2H, m, C 1');

2,67 (2H, m,Cl');

2,94 (1H, ddd, 9,1 6,3, 4,9 Hz, C 6a);

3,10 (2H, dd, 8,8, 2,7 Hz, —CH2—OH);

3,18 (2H, dd, 8,8, 4,4 Hz, —ÜHj—OH);

3.50 (1H, dd, 9,1, 9,1 Hz, C 6j5)T 3,86 (1H, dd, 9,1, 4,9 Hz, C 6a);

5,27 (1H, d, 6,3 Hz, C 11a);

5,30 (2H, —OCHjO—);

5,33 (2H, —OÜH^O—);

6,36 (1H, C 10);

6.52 (1H, C 4);

6.53 (1H, C 7);

7.08 (1H, C 1) ppm.

UV (metanolban):

204 nm (el 16 000), 230 nm (e8000),

292 nm (e9400), 308 nm (el 1 800).

CD (metanolban):

65

50

55

60

237 nm (Ae — 6,68), 280 nm (Ae-0,46),

299 nm (Ae- 1,72).

Az NMR adatok szerint a cabenegrin II vegyület 3:1 arányú epimerkeverék a C-3' hely tekintetében. A cabenegrin I és cabenegrin II vegyületek szerkezetét megfelelő racemátjaik szintézise megerősítette.

A találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek terápiásán aktív készítmények hatóanyagai lehetnek, amely készítmények kígyóméreg elleni szerként és mérgező rovarok csípései elleni szerként hatásosak.

Ezenkívül patogén bakteriális fertőzések, így E. coli endotoxinok, kolbászmérgezés és egyéb olyan mérgezések esetében is hatásosak, amelyek a központi idegrendszerre hatnak és légzőszervi bénulást okoznak, továbbá hatásosak a szívérrendszerre ható mérgezések kezelésében.

A találmány szerinti extrakciós eljárásokkal kapott új vegyületek esetében a biológiailag aktiv vegyületek jelenlétét egereken végzett in vivo vizsgálatokkal határoztuk meg.

A vizsgálatban vegyes nemű, 20-25 g súlyú Swiss Webster fehér egereket használtunk. Mindegyik állatcsoportot megmérgeztük oly módon, hogy a Fér de Lance (Bothrops atrox) kígyómérge letális dózisának 2,5-szörösét intraperitoneális injekcióban beadtuk nekik. Kezelés nélkül a megmérgezett állatok néhány percen belül elpusztultak.

A fenti extrakciós eljárás frakcióiból nyert (I) és (II) vegyületeket méregközömbösítő hatás szempontjából úgy vizsgáltuk, hogy az egeret közvetlenül a mérgezés után a frakciókból izolált anyag vizes etanolos (77:23) oldatával injekcióztuk be. Mindegyik állat 0,25 ml-t kapott a megfelelő oldatokból. Ennek alapján a Fér de Lance méreg esetén a túléléshez szükséges minimális dózis a cabenegrin

I esetében 2,8 mg/kg, a cabenegrin II esetében pedig

2,0 mg/kg.

A toxikológiai vizsgálatok azt jelzik, hogy a cabenegrin I és cabenegrin II vizes etanolos oldatának beadása egészséges állatok esetében semmiféle jelentős változást nem okoz a fiziológiai funkciókban. A beadás történhet intravénás vagy intramuszkuláris injekció formájában, vagy történhet orálisan is, gyomorszondán keresztül. Egészséges, nem mérgezett állatoknak beadva semmiféle jelentős vá tozást nem tapasztaltunk az artériás vérnyomás, pulzusszám, légzés, EKG vagy a centrális vénás nyomás mérése esetén, bármikor végeztük is ezeket a vizsgálatokat a cabenegrin I és cabenegrin

II beadása után.

A kísérleti állatoknál a vegyületek beadása nem okoz jelentős változást a nyugalmi akciós potenciálban. a véglemez-potenciálban, az ingerületi átvitelben, az ideg-izom működésében és az agyhullám aktivitásban sem.

1. Kígyóméreggel szembeni méregközömbösitő hatás kutyák esetében.

Kígyóméreg, így a Bothrops atrox, Crotalus adamamteuns vagy Crotalus atrox mérge letális dózisával történő mérgezés hirtelen artériás vérnyomáscsökkenést, pulzusszámcsökkenést és centrális vé3