187396. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kultúrnövények in vitro szövettenyésztéses szaporítási hatásfokának megjavítására
1 18? 396 2 letxvés/lcsi mód viaszkomponensek "u savak I. r. alkoholok hagyományos (kontroll) 32,11 20,55 in vitro 45,21 3,05 a találmány szerinti in vitro 30,73 22,18 A kísérleti eredmények jól mutatják, hogy a diklór-acetil-hexametilén-imin hatására az in vitro nevelt szegfű növényekben a viaszkomponensek összetétele a hagyományos módon nevelt növényekéhez hasonló szintre állt be. Egy következő kísérletsorozatban vizsgáltuk, hogy az (I.) általános képletü vegyületek közül a diklór-acetil-hexametilén-imin különböző koncentrációban való alkalmazása hogyan befolyásolja az in vitro nevelt szegfűnövény totál lipidjeinek zsírsavösszetételét. A kísérletek során a már korábban leírt táptalajon, valamint annak 250-250 ml-nyi mennyiségein, amelyekbe a diklór-acetil-hexametilén-imin különböző mennyiségeit mértük be, neveltünk in vitro szegfűnövénykéket, amelykben azonos fejlettségi stádiumban megvizsgáltuk a leírásunkban már ismertetett módszerrel a totál lipidek zsírsavösszetételét. A mérések eredményeit a következő táblázat mutatja. Kezelési koncom. mg/1 zsírsav % palmi- palmito-sztearintinsav lei! sav sav olajsav linolsav linóiénsav táptalajhoz 0,1 mg/1 koncentrációban indolecetsavat adtunk. A táptalajból különböző mennyiségű diklóracetil-hexametilén-imin hozzáadásával koncentráció sorozatot készítettünk, s a tenyésztést ezeken a táptalajokon folytattuk le. Amikor a gyökérképződés elérte a kívánt mértéket, a szegfűnövénykéket üvegházba telepítettük át in vivo körülmények közé palánta nevelésére. Az átültetett növénykék különböző mértékben alkalmazkodtak az in vivo nevelés körülményeihez, voltak amelyek elpusztultak, voltak amelyek alkalmazkodtak, túlélték az átültetést és fejlődésnek indultak. Az in vivo szaporítás során megszámoltuk a különböző táptalajon nevelt növénykék közül az elpusztultak, illetve túlélőek számát, amelyeket %-osan az itt következő táblázatba foglaltuk össze. táptalaj diklór-acetilhexametilén-imin tartalma mg/1 túlélés %-ban 1 45 2 48 • 4 64 6 96 8 87 10 75 12 70 14 50 20 43 0 (kontroll) 46 0,00 25,82 3.89 7,11 27,97 17,18 18,04 15,60 25,16 3,09 18,94 32,85 23,96 30,80 23.08 4,37 (8,53 25,18 28,85 61,60 24,61 2,50 16,68 32,85 23,26 154,00 21,13 3,38 19,15 29,20 27,04 308,00 26,57 4,00 25,71 25,29 18,43 A mérési eredmények jól szemléltetik, hogy a különböző koncentrációban alkalmazott diklóracetil-hexametilén-imin hatására a zsirsav összetétel a telítetlen zsírsavak irányába tolódott el. A találmány szerinti eljárást az itt következő példákon mutatjuk be, melyekre nem korlátozódik a szabadalmi igény. A mérési adatokból kitűnik, hogy a szegfű eseté- 35 ben a diklór-acetil-hexametilén-imin táptalajhoz való adagolásával a szegfüpalánták üvegházi túlélése a 6 mg/1 koncentrációnál 96%-ra növelhető, tehát a szaporítási technika hatékonysága több mint 100%-kal (kétszeresére) fokozható, ami az 40 eljárás gazdaságosságát nagymértékben javítja. Megfigyelhető volt, hogy a találmány szerinti eljárással nevelt növénykék zöld színe mélyebb tónusú volt, száraik és leveleik erősebbek voltak, mint a kontrollnövénykéké, s e mellett leveleik felü- 45 letét vastagabb viaszréteg borította. 1. példa Szegfű szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítása. Az ismert eljárás szerint üvegházban nevelt szegfüdugványok merisztéma szöveteit steril körülmények között kipreparáltuk és a már leírt Murashige-Skoog táptalajon szaporítottuk. A szegfűmerísztémák először növekedni kezdtek, majd pedig osztódtak. Minden hajtáscsúcsból a táptalajra helyezést követő 6 hét múlva 10-15 hajtás keletkezett, amelyek szétszedve, új, friss táptalajra ültetve továbbszaporításra alkalmasak. A hajtások szaporodási sebessége 10—15 hajtás volt havonta. A szegfűhajtások osztódó fázisa után külön táptalajon következett be a gyökérképződés indukciója, amelyhez az ötszörösére higított koncentrációjú alaptáptalajt használtuk azzal az eltéréssel, hogy a 2. példa 50 Az előző példához hasonlóan szegfű szaporítóanyagot állítottunk elő, melynek során a merisztéma szöveteit ugyancsak az ismertetett Murashige-Skoog táptalajon szaporítottuk el, majd a gyökérképződés indukálásához ötszörösére hígított, 55 0,1 mg/1 indolecetsavat tartalmazó táptalajra ültettük át. Az ezen a módon in vitro nevelt növénykéket olyan földkeverékbe ültettük át üvegházban, amelyet a találmány szerinti (I.) általános képletü vegyületek közül a diklór-acetil-hexametilén-imin 50 oldatával itattunk át a következők szerint. 5 g diklór-acetil-hexametilén-imint 500 ml 70%-os etilalkoholban feloldottunk, majd 19,51 vízbe belekevertük. Az így készített 20 1 oldatot 1 m3 földkeverékhez adagoltuk többszöri átlapátolás mellett. - Az 65 így elkészített talajba, valamint az (I.) általános 4
