187396. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kultúrnövények in vitro szövettenyésztéses szaporítási hatásfokának megjavítására
1 187 396 2 képletű vegyületet nem tartalmazó talajba ültettük el az in vitro nevelt növénykéket, s megfigyeltük üvegházban in vivo növekedésüket. Megállapítottuk, hogy míg a kezeletlen talajon a növénykék 58%-a elpusztult (tehát 42% élte túl az 5 * 6 átültetést), addig a diklór-acetil-hexametilén-imint tartalmazó talajon a növénykéknek csak 8%-a pusztult el, 92%-uk erőteljes fejlődésnek indult. Az előző példához hasonló módon szegfű szaporítóanyagot állítottunk elő, s a növénykéket a gyökérzet kifejlődése után üvegházba, in vivo nevelésre 15 ültettük át, kezeletlen talajba. Ezután a növénykék felét az (I.) általános képletü vegyületek közül a diklór-acetil-hexametilénimint tártalmazó permetezőszerrel kezeltük a kiültetést követően, majd még három alkalommal 3-4 20 napos szünetekkel. A permetezőszer egy litere 10 mg diklór-acetilhexametilén-imint, 0,1 ml Tween 80 emulgeálószert és 0,05M Tris HCl puffert tartalmazott, s pH-ja 6,5 volt. Készítésénél úgy jártunk el, hogy a diklór- 25 acetil-hexametilén-imint néhány csepp 70%-os etilalkoholban feloldottuk, majd így beadagoltuk a puffert tartalmazó vízbe, s ehhez kevertük az emulgeátort. Kísérleteink azt mutatták, hogy míg a permete- 30 zéssel kezelt növénykék 88%-a túlélte az átültetést, addig a nem kezeiteknek csak 42%-a maradt meg. 4. példa 35 alaptáptalajhoz a gyökérképzés indukciója érdekében a 0,1 mg/1 koncentrációjú indol-ecetsav helyett 0,1 mg/1 koncentrációban p-klór-fenoxi-ecetsavat adagoltunk. Ezek után a különböző I. általános képletű vegyületeket különböző koncentrációban (2, 5, 10, 20 mg/1) a táptalajhoz kevertük, majd a növényeket a gyökérzet kifejlődéséig a táptalajon neveltük. A gyökérzet kiültetésre alkalmas méretének elérésekor a növénykéket üvegházba telepítettük és neveltük. A növénykék különbözőképpen alkalmazkodtak az in vivo körülményekhez. Az egyenletes és biztos fejlődés után megvizsgáltuk és megszámoltuk az elpusztult és a túlélő növénykék számát, ill. arányát. Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaltuk össze: I. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az I. képletű vegyület koncentrációja 2 mg/1 5 mg/1 10 mg/1 20 mg/1 Kezeletlen kontroll 61 61 61 61 K-acetil-hexametilén-imin 80 81 80 81 N-(klór-acetil)-hexametilén- 76 76 76 70 imin N-(diklór-acetil)-hexameti- 100 lén-imin 100 100 100 N-(triklór-acetil)-hexametilén- Jmin 65 65 63 63 N-(diklór-acetil)-diizobutil- 68 amid 66 77 61 N-(diklór-acetil)-izopropil- 72 amid 71 71 71 N-(diklór-acetil)-terc.butil- 71 amid 72 72 72 N-(diklór-acetil)-hexil-amin - 94 95 98 100 Gerbera szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítása. Gerberanövényeket szaporítottunk in vitro a már ismert, a szaporításra és gyökereztetésre Murashigeés munkatársai [J. Hort. Sei. 9, 175-180 (1974)] által kidolgozott módszer szerint. A gyökereztető táptalaj egy részéhez 10 mg/1 koncentrációban diklór-acetil-hexametilén-imint adagoltunk, s a növénykék felét ezen a táptalajon gyökereztettük. Az in vitro nevelt növény kéket ezután üvegházba kiültettük, s az in vivo körülmények között továbbnevelteknél megszámoltuk az elpusztult, illetve túlélő palántákat. Megállapítottuk, hogy míg a diklór-acetil-hexametilén-imint 10 mg/1 koncentrációban tartalmazó táptalajon gyökereztetett növények 98-100%-ban túlélték a kiültetést, addig a kezeletlen kontroll táptalajon gyökereztetett növények 30-35%-a elpusztult. A gerbera lombiknövény habitusa is jelentős változást mutatott, ugyanis a kezelt növények zömökebbek, leveleik keményebbek és fejlettebbek voltak, mint a kezeletlenek. 5. példa Szegfű szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 1. sz. példában leírtai szerint, azzal az eltéréssel, hogy az ötszörösére hígított 40 45 50 55 60 A táblázat adataiból jól látható egyrészt, hogy az indol-ecetsav helyett alkalmazott p-klór-fenoxiecetsav a szegfüpalánták túlélési %-kát 46-ról 61-re emelte, másrészt, hogy a találmány szerinti I. ált. képletű N-szubsztituált-acetamid vegyületek oldatainak alkalmazása tovább fokozta a kiültetés utáni életképességet. Megfigyeltük továbbá, hogy a találmány szerinti eljárással nevelt szegfűnövénykék szárai, levelei erősebbek, sötétebb zöld színűek, mint a kezeletlen k ontrollnövényeké. 6. példa Gerbera szaporítóanyag szövettenyésztéses előállítását végeztük az 5. példában leírtak szerint. Az alkalmazott I. ált. képletű vegyületek nevét, alkalmazási koncentrációját és a kiültetés utáni túlélési %-kot az alábbi táblázatban foglaltuk össze: I. ált. képletű vegyület kémiai neve megfelelően gyökeresedett, ill. túlélő növénykék %-os részaránya ha az 1. képletű vegyület koncentrációja 2 mg/1 5 mg/1 10 mg/1 20 mg/1 Kezeletlen kontroll 63 63 63 63 N-acetil-hexametilén-imin 93 94 93 92 N-(klór-acetil)-hexametilén- 65 imin 78 82 79 80
