187324. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxi-alkil-purinok észter-származékainak előállítására
1 18" 324 2 15 458), mind a szukcinilésztert átalakítani NPT 15 392-vé, szerkezetük további bizonyítéka. 3. táblázat A változó pH-érték hatása az acetoxi-nonil-hipoxantin (NPT 15 458) és a szukciniloxbnonil-hipoxantíri (NPT 15 45?) kémiai stabilitására Vegyüld Koftcvmráeió NPT 15 392 (0.36 nm/ml) pH = 1,0 100 (kontroll) pH = 7.0 100 pH = 9,5 100 NPT 15 457 (0,36 pm/ml) pH = 1,0 2 PH = 7,0 ö pH = 9,5 8 NPT 15 458 (0,36 pm/ml) pH = 1.0 8 pH = 7.0 0 PH = 9,5 28 * 3,5 órás inkubálás 37 °C-on; nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással meghalározva. Vírusölő tulajdonságok Az NPT 15 457 és az NPT 15 458 influenzavírus szaporodását gátló hatását hemadszorpciós vizsgálattal mértük. Mint ez a 4. táblázat adataiból is kitűnik, az NPT 15 458 potenciális gyógyszer („pro-gyógyszer”) - amely majdnem teljes mértékben NPT 15 392-vé hasad (aktív gyógyszer) - az aktív gyógyszeréhez (az NPT 15 392-éhez) hasonló vírusszaporodást gátló képességgel rendelkezik. Sőt, valójában úgy tűnik, hogy az NPT 15 458 még kissé hatékonyabb is, ami talán a nagyobb intracelluláris NPT 15 458 abszorpciónak tulajdonítható. A szukcinil-származék esetében - minthogy 7,2 pH-án negatív töltéssel rendelkezik - nem várható, hogy ugyanilyen könnyen behatoljon a sejtekbe, így ebben az eljárásban kevésbé lesz hatékony. 4. táblázat A szukcinil-oxi-nonil-hipoxantin (NPT 15457) és az acetoxi-nonil-hipoxantin (NPT 15458) vírusölő tulajdonságainak összehasonlítása az NPT 15393- ével Gyógyszer [g/ml] Az influenzavírus szaporodására kifejtett gátló hatás [%] A vegyület koncentrációja [nanomól/ml] egységben 0 0,36 3,6 10,8 36 NPT 15 392 0 20 30 42 73 (kontroll) NPT 15 457 0 18 0 18 13 NPT 15 458 0 26 40 80 88 Immunomodulátor hatás Az NPT 15 392 ecetsavas (NPT 15 458) és borostyánkősavas észterének (NPT 15 457) immunrendszert moduláló képességét - mind in vitro, mind in vivo - az alábbi módszerek felhasználásával mértük: 1. Mitogén úton előidézett lymphocyta proliferáció egér lépsejteket használva (in vitro). 2. Mitogén úton előidézett lymphocyta proliferáció humán perifériás vérlymphocyták (HPBL) felhasználásával (in vitro). 3. Aktív rozettaképződés fokozása (in vitro). 4. IgM antitest képződésének fokozása bárány vörösvértestekkel (SRBC) immunizált egerekben (in vivo). 1. Az 5. táblázat adatai világosan mutatják az ® NPT 15 458 azon képességéi, hogy fokozza a PH A által előidézett lymphocyta proliferáeiót. A méréseket triciumma! jelzett timldin beépítésével végeztük. Az 50 rnikrogramm/ml-es NPT 15 458 koncentráció esetében mintegy 25',’,,-os növekedés volt 10 megfigyelhető. Hasonló mértékű növekedést tapasztaltunk 10 mikrogramm,ml-es NPT 15 392 koncentrációnál. 2. A 6. táblázat adatai megmutatják, hogy ekvimoláris koncentrációjú NPT 15 457 és NPT 15 458 15 hatékony a PH A által előidézett lymphocyta proliferáció fokozásában, HPBL-t használva. Ez a lény érdekes a 9. táblázat adatainak tükrében, amelyek azt mutatják, hogy a HPBL mindkét észtert NPT 15 392-re hasítja. Az NPT 15 458 - amely nagyobb 20 mértékben hasad, mint az NPT 15 457 - hatékonyabb potenciátora a PHA által előidézett átalakulásnak. 3. Mint ez a 7. táblázatból kitűnik, mind az NPT 15 457, mind az NPT 15 458 NPBL-ben hatéko-25 nyan modulálja az aktív rozettaképződést. Érdemes rá felfigyelni, hogy az 1. kísérletben - amelyben a placebóval kezelt lymphocyták aktív rozettaszintje igen alacsony (immuno-deficiens) - az NPT 15 457 és az NPT 15 458 az elnyomott immunitás 30 helyreállításában éppoly aktív, mint az NPT 15 392. A 2. kísérletben a placebóval kezelt kontrollok az aktív rozetták vonatkozásában abnormálisán magas értékekkel rendelkeztek. Ebben a példában az NPT 15 392 és az NPT 15 458 képesek 35 voltak a normális értékekhez képest magas szintek csökkentésére; ezzel igazolták e gyógyszerek immunomodulátor tulajdonságait. 4. Az NPT 15 457-et, az NPT 15 458-at, valamint az NPT 15 392 „aktív” gyógyszert SRBC bárány 4® vörösvértestekkel immunizált Balb/c egereknek adtuk be. Mértük az SRBC-re való antitest-termelést. Érdemes megjegyezni, hogy az NPT 15 458 és az NPT 15 392 igen hatékonyan moduláltak az IgM antitestek termelését. A vizsgált szinteken az NPT 45 15 392 46%-kal növelte az IgM termelést. Az NPT 15 392 magasabb dózisai a kontroll értékekhez képest kisebb mértékű növekedést vagy csökkenést idéznek elő. Érdemes megjegyezni, hogy az NPT 15 458 - amely átalakult NPT 15 392-vé és amely 50 legalább 10-szer magasabb NPT 15 392 szintet hoz létre a vérben (lásd 10. táblázat) - inhibitálja az IgM képződést (lásd 8. táblázat). Ez várható, minthogy az NPT 15 458 igen magas NPT 15 392 szintet hoz létre, ami nagy valószínűséggel inhibitálja az. 55 IgM képződést. A 8. táblázat adatai az NPT 15 457 és az NPT 15 458 immunomodulátor hatását mutatják be. Megjegyzendő, hogy az NPT 15 457 hatása kisebb az NPT 15 458 hatásánál, valamint kevesebb NPT 15 457 alakul át NPT 15 392-vé, 60 mint NPT 15 458 (10. táblázat). 65 6
