187281. lajstromszámú szabadalom • Eljárás linkomicin-származékok előállítására
1 187.281 2 Baktérium UC MIC (pg/ml) KlindamicinU-57 930E 6513 0,06 0,12 Bacteroides 6428 0,06 0,25 fragilis 6864 3,9 2,0 6862 7,8 15,6 Bacteroides thetaiotao-6512 2,0 0,5 micron Bacteroides distasonis Bacteroides 6518 0,12 0,03 melaninogeni-6326 0,06 0,06 cus Clostridium 247 0,06 0,12 perfringens 6509 0,06 0,12 Clostridium 6329 0,06 0,12 novyi B Clostridium 6508 7,8 7,8 tertium Clostridium cadaveris Clostridium sordellii Clostridium 6510 6505 6521 <;o,03 2,0 <10,03 0,06 0,5 ^0,03 ten tani Clostridium botulinum A 6506 0,25 ^0,03 Clostridium bifermentans 6507 0,50 0,06 6834 7,8 3,9 Clostridium difficile 6857 6858 6860 250 3,9 200 125 3,9 500 6861 3,9 2,0 Propionibacteri-6564 0,06 0,12 urn 6575 0,03 0,06 acnes / / Eubacterium limosum 6515 2,0 2,0 Eubacterium lentum 6522 0,50 1,0 Actinomyces neaslundii 5920 0,25 0,25 Fusobacterium nucleatum Fusobacterium 6516 6324 6052 0,12 0,06 15,6 0,12 0,06 3,9 varium Fusobacterium necrophorum Peptococcus 6568 0,06 0,06 0,25 asaccharolyti-6214 0,50 cus Peptococcus 6528 0,06 0,06 magnus Peptococcus 6319 ^0,03 0,06 aerogenes Peptostrepto-0,12 coccus 6321 0,12 anaerobius Az eljárást a következők szerint hajtjuk végre: A hatóanyagokból 1,0 ml térfogatú Schaedlertáptalajban kétszeres hígítású sorozatot készítünk és az antibiotikumot is tartalmazó táptalajhoz 9 ml olvadt állapotú (47 °C hőmérsékletű) Wilkens- Chalgren agart adunk. Az antibiotikummal történő összekeverés után az agart 100 mm *20 mm méretű Petri-csészébe öntjük. A Petri-csészéket egy éjszakán keresztül állni hagyjuk a beoltás előtt. A tenyészeteket szétterítjük Wilkens-Chalgren agaron és BBL anaerob edényben 48 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten tenyésztjük. A tenyészeteket összegyűjtjük a lemezről és Schaedler-táptalajban 0,5 McFarland Standard (108 sejt/ml) zavarosságnak megfelelő sejtszuszpenziót készítünk. A szuszpenziót Steers replikátorba pipettázzuk és mintegy 1-2 pl-t az agarlemezek felületére viszünk. A lemezeket a beoltás után néhány percig száradni hagyjuk, majd BBL anaerob edényben (85% nitrogén, 10% hidrogén, 5% széndioxid) 72 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. A minimális gátló koncentráció (MIC) a hatóanyagnak az a legkisebb mennyisége amely a növekedést gátolja. Nagyon halvány film kialakulását vagy 3-nál kevesebb kolónia kialakulását negatívnak tekintjük. A Wilkens-Chalgren agar elkészítése: A következő hatóanyagokat mérjük ki és oldjuk fel 1000 ml desztillált vízben. A pH-érték 7,0-7,2 közötti. Trypticase 10 g Gelysate 10 g Élesztőextraktum 5 g Glukóz 1 g Nátrium-klorid 5 g L-arginin - szabad bázis 1 g Piroszőlősav-nátriumsó 1 g Agar 15 g A kapott oldathoz Hem- és K, vitamin-oldato-kát adunk olyan mennyiségben, hogy a végső koncentráció 5 pg/ml hemin és 0,5 g/ml K, vitamin legyen. A kapott anyagot 15 percen keresztül 121 °C hőmérsékletű autoklávban tartjuk aerob körülmények között. A Hem alapanyag összetétele: 0,5 g hemin + 10 ml 1 N nátrium-hidroxid-oldat + 990 ml H2. Az anyagot 12 percen keresztül 121 °C hőmérsékletű autoklávban tartjuk. 1 l közegre számítva 10 ml alapanyagot adunk. A K, vitamin alapanyagösszetétele: 0,05 ml K, vitamin-oldat + 20 ml 95%-os etanol. Az anyagot szűrjük és sterilizáljuk. 1 1 közegre számítva 0,2 ml alapanyagot adagolunk. Az U-57 930E vegyület LDS0 értéke egereken intraperitoneálisan 592 mg/kg. Ezt az értéket két különböző, de azonos módon meghatározott LDJ0 érték alapján kaptuk. Ez az LD érték mintegy kétszer olyan nagy mint a klindamicin-hidroklorid LDS0 értéke. Az LD50 érték alapján az U-57 930E vegyület intraperitoneális akut toxicitása mintegy fele a klindamicin-hidroklorid akut toxicitásának. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
