187111. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tieno[3,2-c]piridin- származékok és azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 a) ADP által kiváltott vérlemezke-aggragáció ; b) Kollagén által kiváltott vérlemezke-aggregálómeghatározása " dás meghatározása 187111 i 2 ml citrátozott vért gyorsan átöntöttünk egy mágneses keverőre helyezett pohárba. Néhány perces keverés után 0,4 ml, 0,66 pg/ml adenozindifoszfát (ADP) oldatot adtunk hozzá. 90 percig kevertük, majd két 0,5 ml-es mintát vettünk:- az elsőt 0,5 ml EDTA-formol-oldattal kevertük,- a másodikat 0,5 ml EDTA-oldattal kevertük. Az EDTA-formol adagolásának az a célja, hogy, stabilizálja a vért és ezáltal rögzítse az aggregálódást, míg az EDTA magában a képződött vérlemezke-csomók dezaggregálódását okozza. Az elegyet 10 percig állni hagytuk, majd kis fordulatszámmal 5 percig centrifugálva elválasztottuk a vörös vértesteket a vérlemezkében gazdag plazmát (PRP) tartalmazó felülúszót elválasztottuk, és hígítás után vérlemezkét számláltunk. Az aggregálódás intenzitását a következőképpen számoltuk: lemezkék száma az EDTA-formolos oldatban------------:-------------------------:------:-------------x lemezkék száma az EDTA-tartalmü oldatban x 100 = nem aggregálódott lemezkék százaléka A vizsgált termék vérlemezke-aggregálódást gátló hatása javul, ahogyan az arány közeledik a százhoz. Patkányok ötös csoportjánál (kezelt és kezeletlen) a nem-aggregálódott vérlemezkék százalékos átlagát mutató eredményeket az 1. táblázatban foglaltuk össze. 1. Táblázat: ADP-teszt* Vizsgált anyag Dózis (mg/kg) Eredmény kezeletlen csoport 3x25 16±4 1. vegyület 94 ± 3 kezeletlen csoport 3x5 20± 11 1. vegyület 82± 11 kezeletlen csoport 3x2,5 23 ±15 1. vegyület 56 ±17 kezeletlen csoport 3x25 8±0 10. vegyület 66 ±2 10. vegyület 3 x 12,5 49 ±11 kezeletlen csoport 3x 10 8± 1 10. vegyület • 24 ± 5 kezeletlen csoport 3x60 11 ±0 9. vegyület 65±7 kezeletlen csoport 3x100 13 ± 3 4. vegyület 89 ± 1 kezeletlen csoport 3x 100 3 ± 1 4. vegyület 89 ±4 kezeletlen csoport 3x 100 4±0 2. vegyület 72 ±12 kezeletlen csoport 11 3x100 4±0 12. vegyület 27 ±5 kezeletlen csoport 3x100 2±0 17. vegyület 11 ±3 20. vegyület 3x 100 4± 1 kezeletlen csoport 3x 100 18 ± 1 6. vegyület 22 ±4 * Adagolás módja: p.o. 0,10 ml 10 pg/ml kollagént tartalmazó oldatot 5 adtunk 1,5 ml citrátozott vérhez. A kevert mintában folyamatosan számláltuk az aggregálódott lemezkéket. A szabad lemezkék számának csökkenését az idő folyamán folyamatosan vizsgáltuk, és megszerkesz- 1 g tettük a kezdeti aggregálódási arányt mutató görbét. Patkányok ötös csoportján (kezelt és kezeletlen) megfigyelt eredményeket a 2. táblázatban foglaltuk össze. 15 2. Táblázat: Kollagén-teszt* Vizsgált anyag Dózis (mg/kg) Eredmény kezeletlen csoport 3x25 3,12 ±0,47 1. vegyület 0,14 ±0,03 kezeletlen csoport 3x5 2,17 ±0,64 1. vegyület 0,19 ±0,04 kezeletlen csoport 3x2,5 5,00 ±1,02 1. vegyület 0,60 ± 0,20 kezeletlen csoport 3,92 ±0,63 10. vegyület 3x25 0,16 ±0,07 10. vegyület 3 x 12,5 0,54 ±0,12 kezeletlen csoport 2,00 ±0,35 7. vegyület 3x100 0,66 ±0,18 8. vegyület 3x 100 0,86 ±0,18 kezeletlen csoport 3x60 2,25 ±0,32 9. vegyület 0,11 ± 0,01 kezelëtlen csoport 3x 100 3,41 ±0,55 4. vegyület 0,12 ± 0,02 kezeletlen csoport 3x 100 4,73 ±0,55 4. vegyület 0,30 ±0,02 kezeletlen csoport 3x 100 5,00 ±1,06 2. vegyület 0,51 ±0,18 kezeletlen csoport 3x100 2,25 ±0,32 11. vegyület 0,83 ±0,02 kezeletlen csoport 3x 100 2,77 ±0,32 14. vegyület 0,83 ±0,02 kezeletlen csoport 3x 100- 3,99 ±0,40 17. vegyület 2,22 ± 0,10 kezeletlen csoport 3x 100 5,01 ±0,79 21. vegyület ' 3,04 ±0,22 kezeletlen csoport 3x100 11,35 ± 1,01 18. vegyület 10,82 ±0,81 50 Adagolás módja: p.o. c) Vérzési idő meghatározása 55 A vérlemezke-aggregálódás gátlásának vizsgálata kiterjedt a találmány szerinti vegyület vérzési időre gyakorolt hatására is. A vizsgálatot L. Stella, M. B. Donáti és G. de - Geatano, Thromb. Rés., 1975., 7, 709-716 helyen 60 ismertetett módszerével végeztük. A vizsgálatokat patkányokon végeztük. A vizsgált vegyületeket per os adagoltuk az állatoknak 5%-os vizes gumiárábikum-oldattal készült szuszpenzió formájában, 10ml/kg mennyiségben, 65 65 órával, 41 órával és 17 órával a meghatározás előtt. 5
