187039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákos megbetegedések kezelésére alkalmas növényi extraktumok előállítására

.187.039

A találmány tárgya eljárás humán és állatgyógyászati célú, rákos megbetegedés megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására.

A Hypoxidaceae családba tartozó növények extraktumait P388 egereken véglett ln vivo sorozatvizsgálatban limfocita leukémia kezelésére hatásosnak találták [Id.: Distribution of Anticancer Activity in Higher Plants', A. Barclay R.E. Purdue, Cancer Treatment Reports 60, 1081-1113, (1976)]. Jelen találmány szempontjából a limfocita leukémiát nem tekintjük rákos megbetegedésnek, amennyiben mégis annak tekintenénk, nem tartjuk a találmány oltalmi körébe tartozónak. A Hypoxis nemzetségbe tartozó növények extraktumait alkalmazzák még gyulladásgátló szerként és prosztata hlpertrófla kezelésében is (Id. a 1595 240., az 1.417272. és a 1.259503. számú nagy-brítanniai szabadalmi leírásokban).

Az ismert találmányok szerinti kiindulási anyagból a találmány szerinti eljárással az eddigiektől eltérő aktív vegyületet nyerünk, bár a találmány szerinti extrahálási eljárást már korábban alkalmazták, például az 1.417272. számú nagy-britanniai szabadalmi bejelentésben szerepel, mivel a várt vegyületet nem tudták kiextrahálni vele, és nem ismerték fel, hogy az extraktum más, nem várt aktív vegyületet - a találmány szerint nyert vegyületet - tartalmaz, az eljárást, mint használhatatlant elvetették.

A találmány szerinti, rákos megbetegedés megelőzésére és kezelésére alkalmas készítmények az (I) képletü vegyületet tartalmazzák előnyösen vizes, alkoholos, vizes alkoholban lévő oldat formájában vagy más, a Hypoxidaceae családba tartozó növényekből készített extraktumként. Feltehetőleg valamennyi, a Hypoxidaceae családba tartozó faj alkalmazható az előzőekben ismertetett célra, de különösen jó eredményeket értünk el a következő, a Hypoxis nemzetségbe tartozó fajokkal: Hypoxis acuminata, Hypoxis nitida, H. obtusa-nitida, H. latifolia, H. rigjduli, H. rooperi. Különösen kiváló eredményeket kaptunk H. rooperi és Spiloxene schlechten alkoholos extraktumaival.

Anélkül, hogy erre az elméletre kívánnánk szorítkozni, úgy véljük,hogy az extraktumok rákellenes hatása az (I) képletű vegyületek és glukozidjaik jelenlétének köszönhető.

Az alkalmazandó dózis egyénenként és a rákos megbetegedés súlyosságától függően változó. Általában azonban napi adagként 600—2400 mg a növényi extraktumból nyert port vagy 300-1200 mg (I) képletű vegyületet találtunk hatásosnak.

Mint az előzőekben már említettük, az extrahálást vízzel vagy alkohollal vagy ezek elegyével végezhetjük. Az alábbi példák a találmány szerinti extrakciós eljárást mutatják be.

1. példa

10 kg frissen pépesített Hypoxis rooperi gumót 2S 1 etanollal szobahőmérsékleten 48 órán át extrahálunk. Leszűrjük, vákuumbn bepároljuk, majd fagyasztva szárítjuk. Bymódon 729 g barna port nyerünk. 10 g fenti nyersterméket preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítunk PrepPAK-500/Clg fordított fázisú oszlopon, oldószerként metanol, víz 5050 arányú elegyét

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

alkalmazva. Dymódon 6,9 g, a terméket feldúsítva tartalmazó frakciót kapunk. E frakció 10 g-ját 230-400 mesh Si gel 60-nal töltött, 45.600 mm-es oszlopon, oldószerként bután-2-ol, benzol, víz, metanol 432:1 arányú elegyét alkalmazva továbbtisztítjuk. 10 g-nyi frakcióból 7,9 g bután-2-ol-ból kristályosított (I) képletü vegyületet nyerünk. Ez a mennyiség a kiindulási anyagként alkalmazott gumóra vonatkoztatva 4,0%. A termék olvadáspontja 147-148 °C [a]20, -110° (I< 0,45 metanolban).

Elemi analízis a C29H34OM - 2HjO képletre: számított: C:5420, H: 5,96, HaO: 5,61%, talált: C: 54,18, H: 6,01%.

Tmax (KBr): 3150-3500 (hidroxil csoport hidrogénje) cm'1, tr(metanolban): 247, 257 és 287 nm, 8 (CD3OD), 3,10-4,05 (14H, m, 2 proton a 3- -helyzetű szénatomon és 2 glukozil proton), 4,75 (2H, m, 2 proton az 1-helyzetű szénatomon), 6,06 (H, dt, J= 15,0 és J= 5,0 Hz,4-helyzetű szénatomprotonja), 6,53 (1H, d, J= 15 Hz, 5-heIyzetű szénatom protonja), 6,65-6,90 (4H, m, aromás H), 7,07 (2H,d,aromás H).

2. példa

A következőkben ismertetésre kerülő extrakciós eljárásokat az extrahálásra legalkalmasabb módszer és körülmények kiválasztása céljából végeztük.

a) 10 kg reszelt Hypoxis rooperi gumót levegőn szárítunk, a kapott 2,95 kg terméket 1 órán át extraháljuk 20 1 forrásban lévő vízzel. Az extraktumot porlasztva szárítjuk. Dymódon 550 g, vízben részlegesen oldódó halványbama, por alakú terméket nyerünk, amely 20% (I) képletü vegyületet tartalmaz.

b) 10 kg H. rooperi maceráit gumójának lecentrifugálásával kapott szilárd anyagot 1,5 1, 5 °C hőmérsékletű vízzel hígítjuk, és a 4 1 felülúszót porlasztva szárítjuk. Ilymódon 900 g, vízben részlegesen oldódó halvány krémszínű por aiakú terméket nyerünk, amely 30% (I) képletű vegyületet tartalmaz.

c) 10 kg pépesített Hypoxis obtusa-nitida gumót 15 1, 25 °C hőmérsékletű vízzel 6 órán át extrahálunk, extrahálás közben időnként megkeverve. Az extraktumból nyert 12,78 1 szűrletet fagyasztva szárítjuk. Ilymódon 757 g, vízben részlegesen oldható, halvány barna, por alakú terméket nyerünk, mely 35% (I) képletű vegyületet tartalmaz.

A visszamaradó 10,8 kg nedves pépet 10,81 forrásban lévő abszolút etanollal 20 percig extraháljuk. A leszűrt extraktumot az alkohol nagy részének eltávolítására vákuumban bepároljuk, majd vízzel 1 literre hígítjuk és fagyasztva szárítjuk. Ilymódon 361 g, vízben szinte tökéletesen oldódó halványbama, por alakú terméket nyerünk, amely 43% (I) képletű vegyületet tartalmaz.

d) 10 kg pépesített H. obtusa-nitida gumót 15 1 fonásban lévő vízzel 5 percig extrahálunk. Az extraktumot leszűrjük, a kapott 10,4 1 szűrletet fagyasztva szárítjuk. Dymódon 742 g, vízben részlegesen oldódó halványbama por alakú terméket nyerünk, amely 37% (I) képletü vegyületet tartalmaz.

e) 10 kg pépesített H. obtusa-nitida gumót 25 1, 25 °C hőmérsékletű etanollal állandó keverés mellett 66 órán át extrahálunk. Az extraktumból kapott 23 1 szűrletet vákuumban bepároljuk, ilymódon az alkohol nagy részt eltávolítjuk, majd 1 1 vízzel meghígít-