186877. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, luteinizáló hormont felszabadító hormon antagonisták és savaddiciós sóik előállítására
I 186877 2 b) a védőcsoportnak meg kell őriznie védő hatását (azaz nem szabad iehasadnia az összekapcsolás körülményei között); és c) az oldalláncot védő csoportnak a kívánt aminosavszekvenciájú pepiid szintézisének befejezése után olyan eljárással eltávolíthatónak kell lennie, melynek körülményei között a peptidlánc nem változik. Megfelelő a-amino-csoportot védő csoportok, például az R9 csoport jelentésében a következők: 1. alifás uretán védőcsoport, melyet például a tercbutiloxi-karbonil-, a diizopjopil-metoxi-karbonií-, a bifeni!-izcpropi!-oxi~karbonil-, az izopropil-oxikarbonü-, a terc-amil-oxi-karbonil-, az etoxikarbonil- és az allil-oxi-karbonil-csoporí képvisel; 2. cikloalkil-uretán típusú védőcsoportok, melyeket a ciklopentil-oxi-karbortil-, adamaniil-oxíkarbonii-, d-izobornil-oxi-karbonil- és ciklohexiloxi-karbonil-csoport képvisel és a nitro-fenil-szulfenil-csoport; az a,a-dimetil-3,5-dimetoxi-benzil^xi-karbonil-csoport és a tritilcsoport. Előnyös aamino-csoportot védő csoportok a terc-hutil-oxi- Karbonil-, a ciklopentil-oxi-karbonil-, a terc-amiloxi-karbonil-, a d-izobornil-oxi-karbonil, a 2-nitrofenil-szulfenil-, a biíenil-izopropil-oxi-karbonií- és az a,a-dimelil-3,5-dimeíoxi-benzii-oxi-karbonilcsoport. Szilárd fázisú eljárás alkalmazása esetén a szintézist a peptid C-terminálisáról kezdjük, szilárd gyantához kötött, védett a-amino-csoporítal bíró a-aminosavat használunk. Ilyen kiindulási anyag Készíthető például védett a-amino-csoportú glicinnek benzhidril-amin gyantához, klór-metilezett gyantához vagy hidroxi-metil gyantához való kötésével, melyek közül az előbbi az előnyös megoldás. Benzhidril-amin gyanta előállítására szolgáló eljá. ást ismertetnek Rivaille, P. és munkatársai a Helv. Chim. Acta, 54, 2772 (1971) irodalmi helyen, hidroxi-metií gyanta előállítására szolgáló eljárást pedig Bodanszky, M. és J. T. Sheehan, Chem. Ind. (London), 38, 1597 (1966) irodalmi helyen. A klór-metiiezett gyanta kereskedelmi forgalomban kapható, a Bio Rád Laboratories (Richmond, California) terméke. Benzhidril-amin gyanta alkalmazásakor a védett a-amino-csoporttal bíró glicin vagy D-alanin és a gyanta között képződő amid-csoport képez kötést az (V) általános képletü vegyületben látható módon. Ez lehetővé teszi, hogy miután az aminosavakat a megfelelő sorrendben összekapcsoltuk, a gyantahordozót a kötést létesítő csoporttal együtt lehasítsuk a kötött pepiidről, és ezáltal a kívánt vegyületnek a C-terminálison aminosav-amiddal végződő formáját kapjuk. Ebben az esetben hidrogén-fluoridot. alkalmazunk a gyantahordozó lehasítására, ez egyúttal az oldalláncot védő csoportokat is eltávolítja, és a kívánt dekapeptidet nyerjük. Közelebbről, a találmány szerinti eljárás egyik foganatosítási módja szerint valamely védett aamino-csoportot tartalmazó aminosavat, például valamely védett a-aminó-csoportot tartalmazó helyettesített glicint, előnyösen terc-butii-oxi-karbonil-giicint, vagy valamely, védett a-amino-csoportot tartalmazó helyettesített D-alanint, előnyösen terc-butil-oxi-karbonil-D-alanint valamely karboxil-csoport .t aktiváló vegyüiet, előnyösen diciklohexil-karbodiimid vagy diizopropil-karbodiimid segítségével benzhidril-amin gyantához kötünk. A védett a-amino-csoportot tartalmazó aminosav gyaütahordozóhoz való kötését követően az a-ami no-csoportot védő csoportot metilén-kloridos közegben alkalmazott trifluor-ecetsawal, önmagában trifluor-ecetsawal vagy dioxános közegben lévő hidrogén-kloriddal eltávolítjuk. A védőcsoport eltávolítását 0 °C és szobahőmérséklet (azaz 20-24 °C)közötti hőmérsékleten végezzük. Az a-amino-csoportot védő speciális védőcsoportok eltávolítására más, szokásosan ezek lehasítására alkalmazott reagensek és körülmények is használhatóak, például a Schroeder, E. és K. Lubke által a The Peptides, Vol. I, Academic Press, New York, 165, pp. 72-75 irodalmi helyen ismertetettek. Az a-amino-csoportot védő csoport eltávolítása után a visszamaradó a-amino-védett aminosavakat a kívánt sorrendben lépésenként összekapcsolva kapjuk a kívánt pepiidet. Az egyes védett aminosavakat körülbelül háromszoros feleslegben visszük a szilárd fázisú reaktorba és összekapcsolásukat metilén-kloridos vagy dimetii-formamid és meíilénklorid elegyéből álló közegben végezzük. Ha az összekapcsolódás nem teljes, az összekapcsolásra szolgáló eljárást az a-amino-csoportot védő csoport eltávolítása előtt, még a következő aminosavnak a szilárd fázisú reaktorhoz kapcsolása előtt megismételjük. Az összekapcsolási reakció sikerét minden lépésben ninhidrin reakcióval ellenőrizzük Kaiser, E. és munkatársai Anal. Biochem., 34, 595 (1970) irodalmi helyen ismertetett eljárása szerint. Ily módon a (II) általános képletü vegyületeket - a képletben X jelentése hidrogénatom - nyerjük. Amikor az aminosavakat a kívánt sorrendben összekapcsoltuk, a pepiidet a gvaníahordozóról olyan reagenssel távolítjuk el, mely nemcsak a pepiidet távolítja el a gyantahordozóról, hanem az oldalláncon még rajta lévő védőcsoporíokat is lehasítja, így benzhidril-amin gyanta használata esetén közvetlenül az (I) általános képletü vegyületeket - a képletben X jelentése hidrogénatom ~ nyerjük. AZ (1) általános képletü, X helyettesítőként hidrogénatomtól eltérő helyettesítőt tartalmazó peptid vegyületeket előnyösen úgy állítjuk elő, hogy a megfelelő, X helyettesítőként hidrogénatomot tartalmazó (II) vagy (III) általános képletü vegyületeket alkalmas acilezőszerrel acilezzük, majd az előzőekben leírt módszerek valamelyikével lehasítjuk róla a gyantahordozót a kötést létesítő csoporttal együtt és az acilezett termék összes oldalláncon megmaradt védőcsoportját. A (II) vagy (III) általános képletü, X helyettesítőként rövidszénláncú alkanoil-csoportot tartalmazó vegyületek előállítására acilezöszerként előnyösen rövidszénláncú alkánsav-kloridot vagy -bromidot vagy rövidszénláncú alkánsavanhidridet alkalmazunk valamely szerves protonakceptor - például piridin vagy imidazol - jelenlétében. Azok az (I) általános képletü peptid vegyületek, melyekben X jelentése hidrogénatom ugyancsak alkalmasak arra, hogy megfelelő acilezöszerrel kezelve valamely (I) általános képletü, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
