186839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás újszülött borjúban, csikóban vagy tehén vagy kanca kolosztrumában jelenlévő IGG mennyiségének meghatározására
1 186839 2 A fenti adatok azt mutatják, hogy abban a mértékben, ahogyan a példákban alkalmazott IgG mennyisége csökkent, az agglutinációhoz szükséges szérumminta mennyisége növekedett. A szérumminta hígítását növelnünk kellett, mivel a latexrészecskék méretének növelése a latexrészecskék fajlagos felületének csökkenését idézte elő. 5. példa 0,807 pm részecskeméretű polisztirol-latex 10%-os vizes oldatát az 1. példában leírt pufferral 1:5 arányban való hígítás útján körülbelül 2 súly/térf.-% végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunkban 5 p\ csikó-szérumot adtunk 1080 ml fenti pufferoldathoz, és így alapos átkeveréssel olyan végkoncentrációra állítottuk be, hogy 2160 térfogatrész pufferoldat 0,01 térfogatrész szérumot tartalmazott. A hígított latex 1 cseppjét a tárgylemezen az 1. példában leírt módon 1—3 csepp hígított szérummal kevertük. Az így kapott kísérleti eredményeket a 6. táblázat tartalmazza. 6. táblázat IgG mg/dl (RID-méréssel) A hozzáadott szérum mennyisége 900 x 2=1800 370x2= 740 200 x 2 = 400 1 csepp : az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció negatív 3 csepp: az agglutináció pozitív 3 csepp: az agglutináció negatív A fenti adatokból következik, hogy abban a mértékben, ahogyan a szérummintákban jelenlevő IgG mennyisége csökkent, az agglutinációhoz szükséges szérumminta mennyisége növekedett. A fenti adatok továbbá azt a hatást is mutatják, amely a 4. példából is kitűnik: a latexrészecskék méretének növekvése a latexrészecskék fajlagos felületének csökkenéséhez vezet, és ennek következtében a szérumminta hígításának további növelése szükséges. 6. példa Az 1. példában leírt pufferoldat 1 literéhez 10 g nátrium-kloridot adva fiziológiás konyhasóoldatot tartalmazó N,N-bisz(2-hidroxi-etil)-glicin pufferoldatot kaptunk. 0,109 ^um részecskeméretű polisztirol-butadién-latex 10%-os vizes oldatát e pufferoldattal 1:5 arányban hígítva körülbelül 0,67 súly/térf.-% végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunkban 5 pl csikó-szérumot adtunk 6 ml fenti oldathoz, és alaposan átkevertük. 1 csepp hígított latexoldatot a tárgylemezen az 1. példában leírt módon 1, 2 vagy 3 csepp hígított szérummal kevertük. Az így kapott kísérleti eredményeket a 7. táblázat tartalmazza. 7. táblázat IgG mg/dl (RID-méréssel) A hozzáadott szérum mennyisége J 750x2=1500 500x2=1000 375x2= 750 300x2= 600 0 250x2= 500 166x2= 332 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív . 1 csepp: az agglutináció negatív 2 csepp: az agglutináció pozitív 1 és 2 csepp: az agglutináció negatív 3 csepp: az agglutináció pozitív A fenti adatokból következik, hogy abban a mértékben, ahogyan a szérummintákban jelenlevő IgG mennyisége csökkent, a szérumminta agglutinációhoz szükséges mennyisége növekedett. Az eredmények ezen kívül arra is rámutatnak, amit a pufferoldat 50 megválasztásával elérhetünk. A konyhasóoldatnak pufferoldathoz való adása azzal a következménnyel jár, hogy a 109/im méretű latexrészecskék inkább a 2. példa szerinti, 0,22 pm méretű latexrészecskékhez hasonlóan viselkednek. 25 Csikó-szérummintákat 3000 mg/dl és 1500 mg/d! IgG-vel sorozattá kevertünk, a RID-vizsgálattal meghatározást végeztünk, és ezt alkalmaztuk a következő példában. :vJ 7. példa 0,22 pm részecskeméretű polisztirol-latex 10%-os vizes oldatát 0,1 mólos 8,2 pH-értékű glicin-pufferoldattal 1:5 arányban való hígítás útján körülbelül 2 súly/térf.-% végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunkban 5 pl csikó-szérumot adtunk 6 ml fenti glicin-pufferoldathoz, és alaposan átkevertük. A hígított latex 1 cseppjét a tárgylemezen az 1. példában leírt, hígított szérum 1, 2 vagy 3 cseppkő jével elegyítettük. Az így kapott kísérleti eredményeket a 8. táblázat tartalmazza. 8. táblázat 4^ IgG mg/dl (RID-méréssel) A hozzáadott szérum mennyisége 3000X2 = 6000 1 és 2 csepp: az agglutináció negatív 3 csepp: az agglutináció pozitív ,n 1500x2 = 3000 nu 1, 2 és 3 csepp : az agglutináció negatív A szérummintában levő IgG mennyiségének csökkenése itt is a szérumminta agglutinációhoz szükséges hr) mennyiségének növekvését vonja maga után. A glicinnek a pufferoldatban való jelenléte — az előző példában alkalmazott puffer helyett — az agglutinációhoz szükséges IgG nagyobb mennyiségét teszi szükségessé. fiG 8. példa 0,22 pm részecskeméretű polisztirol-latex 10%-os vizes oldatát 0,1 mólos, 8,2 pH-értékű, literenként 10 6
