186839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás újszülött borjúban, csikóban vagy tehén vagy kanca kolosztrumában jelenlévő IGG mennyiségének meghatározására
1 186839 2 g nátrium-kloridot tartalmazó, glicinből és fiziológiás konyhasóoldatböl álló pufferoldattal 1:5 arányban hígítva körülbelül 2 súly/térf.-% végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunkban 5 ml csikó-szérumot adtunk 6 ml glicin-konyhasóoldat pufferhoz, és jól elkevertük. A hígított latex 1 cseppjét a tárgylemezen az 1. példában leírt módon 1, 2 vagy 3 csepp hígított szérummal elegyítettük. Az így kapott kísérleti eredményeket a 9. táblázat tartalmazza. IgG mg/dl (RID-méréssel) 9. táblázat A hozzáadott szérum mennyisége 750x2 = 1500 500 x 2 = 1000 375x2= 750 300 x 2 = 600 250x2= 500 166x2= 332 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp : az agglutináció negatív 2 csepp : az agglutináció pozitív 1 és 2 csepp: az agglutináció negatív 3 csepp : az agglutináció pozitív A szérummintában jelenlevő IgG mennyiségének csökkenése itt is a szérumminta agglutinációhoz szükséges mennyiségének növelését igényli. A konyhasóoldatnak a 7. példa szerinti glicin-pufferoldathoz való hozzáadása jelentős mértékben növeli az IgG-vizsgálat érzékenységét. Míg a glicin önmagában pufferként használva nagy mennyiségű IgG-t tesz szükségessé az agglutinációhoz, a glicin és fiziológiás konyhasóoldat keverékéből álló puffer érzékenysége hasonló a 2. példa szerinti N,N-bisz(2-hidroxi-etiI)-glicint tartalmazó pufferoldat alkalmazásával elért érzékenységhez. ban előállítottuk az 1. példában leírt csikó-szérummintákat. A csikó-szérumból 5 ml-t adtunk 10 ml fenti pufferoldathoz, és alaposan átkevertük. A hígított szérum 1 cseppjét az 1. példában leírt módon 1 csepp 5 hígított latexhez adtuk. Az így kapott kísérleti eredményeket a 10. táblázat tartalmazza. 10. táblázat 10 ^L‘Tlg/^j ,, A hozzáadott szérum mennyisége (RID-méréssel) 900 x 2= 1800 4 csepp: az agglutináció pozitív 370x2= 740 7 csepp: az agglutináció pozitív 200 x 2 = 400 9 csepp: az agglutináció pozitív A hígított latex további 1 cseppjének hozzáadásával az agglutináció visszafordítható, és ha ekkor további hígított szérumot adunk hozzá, akkor ismét aggluti- 20 náció következik be. Az agglutinációnak ez a reverzibilitása mutatja, hogy a végpont teljes pontossággal megállapítható. 11. példa 25 Az 1. példa és 2. példa szerinti eljárást ismételtük, csikó-szérum helyett azonban újszülött borjú szérumát alkalmaztuk. A vizsgálati eredmények azt mutatták, hogy abban a mértékben, ahogyan a szérummintákban jelenlevő IgG mennyisége csökkent, a szérum- 30 minták agglutinációhoz szükséges mennyisége növekedett. A vizsgálati eredmények továbbá igazolták, hogy a találmány szerinti eljárás az agglutináció méréséhez, tehát a borjúszérummintában levő IgG menynyiségének meghatározására alkalmas. 35 12. példa 9. példa 0,22 pm részecskeméretű polisztirol-latex 10%-os vizes oldatát 0,125 mólos, 8,4 pH-értékű, literenként 8,5 g nátrium-kloridot tartalmazó, borát és fiziológiás konyhasóoldat keverékéből álló pufferrel 1:5 arányban hígítva körülbelül 2 súly/térf.-% végkoncentrációra állítottuk be. E pufferoldatot úgy állítottuk elő, hogy 50 ml 0,1 mólos bórsavoldat és 5 ml 0,1 n nátronlúg keverékét vízzel 100 ml-re töltöttük, 8,2 pH-ra állítottuk, összekevertük, majd a pufferoldathoz 100 ml-enként 8,85 g nátrium-kloridot adtunk. Minden egyes vizsgálatunkban 5 ml csikó-szérumot adtunk 6 ml, borátot és konyhasóoldatot tartalmazó pufferhoz, és alaposan összekevertük. A hígított latex 1 cseppjét tárgylemezen az 1. példában leírt módon 1, 2 vagy 3 csepp hígított szérummal elegyítettük. Vizsgálati eredményeink lényegében ugyanazok voltak, mint amelyeket a 8. példában leírt glicin-konyhasóoldat puffer alkalmazásával kaptunk. 10. példa 0,109 ^m részecskeméretű polisztirol-butadién-latex 10%-os vizes oldatát az 1. példában leírt pufferoldattal 1:5 arányban hígítva körülbelül 2% végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunk-Az 1. példában leírt eljárást ismételtük, azonban csikó-szérum helyett csikó teljesvérét és borjú teljes- 40 vérét alkalmaztuk. A vizsgálati eredmények azt mutatták, hogy a találmány szerinti eljárás az agglutináció mérésére, tehát a csikó és borjú teljesvérében jelenlevő IgG mennyiségének meghatározására alkalmas. 45 13. példa Az 1. példa szerint jártunk el, azonban szérum helyett kolosztrumot alkalmaztunk annak megállapítása 50 céljából, vajon egy olyan kanca vagy tehén kolosztruma, amely éppen lecsikózott vagy megborjazott, képes-e az immunglobulint egy újszülött csikóra vagy borjúra átvinni. Megfelelő kolosztrum IgG-koncentrációja megkö- 55 zelítőleg 1000 mg/dl vagy ennél nagyobb. Abból a célból, hogy a kolosztrummintát arra a koncentrációtartományra hígítsuk, amely az 1. példa szerinti szérumkoncentrációnak közelítőleg megfelel, a kolosztrumot megfelelő pufferoldattal 1:5 arányban hígítva körül- 60 belül 200 mg/dl végkoncentrációra állítottuk be. 0,22 pm részecskeméretű, 10 súly/térf.-%-os polisztirol-oldatot 0,2 mólos, 8,5 pH-értékű N,N-bisz(2- -hidroxi-etil)-gIicin pufferoldattal 1:5 térfogatarányban hígítva körülbelül 2 súly/térf.-%-os végkoncent- 65 rációra állítottuk be. 7
