186839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás újszülött borjúban, csikóban vagy tehén vagy kanca kolosztrumában jelenlévő IGG mennyiségének meghatározására
1 186839 2 tott szérummal elegyítettünk. Ha ekkor sem lépett fel agglutináció, akkor az eljárást 3 csepp hígított szérummal megismételtük. A vizsgálati eredményeket a 3. táblázat mutatja, 3. táblázat IgC mg/di (KID-méréssel) A hozzáadott szérum mennyisége 750x2 = 1500 500 X 2 = 1000 373x2= 750 300 X 2 = 600 250x2= 500 166x2 = 332 1 csepp : az agglutináció pozitív ! csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp : az agglutináció negatív 2 csepp: az agglutináció pozitív 1 ás 2 csepp: az agglutináció negatív 3 csepp: az agglutináció pozitív A 3. táblázatban bemutatott vizsgálati eredményeket összehasonlitottuk az 1. példa szerint kapott titrálási eredményekkel. Mivel a titrálási eredményeket — amint ezt az 1. táblázat mutatja — úgy kaptuk, hogy 1 csepp szérumot adtunk 2 csepp hígított latexhez, azért a 3. táblázatban látható koncentrációkat 2-vel megszoroztuk, hogy az 1, táblázat a 3. táblázattal összehasonlítható legyen. Az eredmények azt mutatják, hogy a 2. példa szerinti eljárással kapott IgG-koncerxtrációk az 1, példa szerinti titrálási eljárással kapott IgG-koneentrációkkal (amelyek a RID-kontrolleljárással kapcsolatban állnak) szoros kapcsolatban vannak. így például 66 mg/dl IgG-koncentráció esetében (166x2 = 332 mg/dl) 3 csepp szérummal pozitív agglutinációt kaptunk; ez 200—400 mg/dl tartományban van, amint ezt az 1. táblázat szerint a 3 csepp hatására jelentkező agglutináció mutatja. Hasonló eredményeket kaptunk a többi IgG-koncentrációk esetében is. Nyilvánvaló, hogy az 1. példában és a 2. példában leírt eljárás végrehajtásával a testfolyadék és a iatex aggiutinációját, s ebből a mintákban jelenlevő IgG- koncentrációját meghatározhatjuk. A szakember a pufferoldat kívánt koncentrációját, valamint a laíexrészecskék méretét és koncentrációját az IgG-koncentrációknak egy testfolyadékban való meghatározása céljából be tudja állítani. Ezek a koncentrációk könnyen optimizálhatók abból a célból, hogy kényelmesen kivitelezhető IgG-vizsgálat álljon rendelkezésünkre. A kővetkező példákban a reakciókörülményeket széles határok között változtatjuk. Ezek 3 reakciókörülmények nem feltétlenül a legkedvezőbbek (optimálisak)- ennek következtében az így kapott agglutinációs értékek., azaz az IgG-koncentrációk több példában nem hasonlíthatók össze közvetlenül az 1. példa szerint kapott agglutinációs értékekkel. Minden egyes példában azonban abban a mértékben, ahogyan a mintában jelenlevő ígG mennyiségét növeltük vagy csökkentettük, az agglutináció úgy változott, hogy az IgG a találmány szerinti eljárással mérhető volt. Ha külön megjegyzést nern teszünk, akkor az alábbi példákban szereplő csikó-szérumok koncentrációit a 2. példa szerint kaptuk. Abból a célból, hogy a részecskeméretnek 0,10/miié való módosításának befolyását megállapítsuk, a következő kísérletet végeztük. 3. példa 3,109 /an részecskeméretű polisztirol-butadién-laíex 10%-os vizes oldatát az i. példában leírt pufferral 5 1:15 arányban való hígítás útján 0,67 súly/térf.-Vo végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunkban 5 ,«1 csikó-szérumot adtunk 6 ml fenti pufferoldathoz, és így alapos átkeve 'éssel olyan végkoncentrációra állítottuk be, hogy 10 12 térfogan ész pufferoldat 0,01 térfogatrész szérumot tas tornázott. A hígított latexkeverék 1 cseppjét az 1. pé'dában leírt módon 1, 2 vagy 3 csepp hígított szérumnál elkevertük. Az így kapott kísérleti eredményeket a 4. táblázat tartalmazza. 15 4. táblázat IgG mg/dl (R: D-méréssel) A hozzáadott szérum mennyisége 753x2=1500 503x2 = 1000 20 375x2= 750 300x2= 600 1 csepp: az agglutináció negatív 2 csepp: az agglutináció pozitív 1 csepp: az agglutináció negatív 2 csepp: az agglutináció pozitív 1 és 2 csepp: az agglutináció negatív 3 csepp: az agglutináció pozitív 1, 2 és 3 csepp: az agglutináció negativ 30 A fenti adatokból következik, hogy abban a mértékben, ahogyan a szérummintákban jelenlevő IgG mennyisége csökkent, az agglutinációhoz szükséges szé um mennyisége növekedett. A latexrészecskék méretének csökkenése a fajlagos felület megfelelő nö- 35 vek véséhez vezetett, s ennek következtében a latexrésze:skék koncentrációjának csökkentése vált szükségessé. Az alábbi 4. és 5. példákban a csíkó-szérummintákaí úgy hígítottuk, hogy az adott táblázatokban be- 40 mutatott IgG-koncentrációk sorozatát kaptuk. 4. példa 0,497 pm részecskeméretű polisztirol-latex 10%-os vizes oldatát az 1. példában leírt pufferral 1:5 arány- 45 ban való hígítás útján körülbelül 2 súly/térf.-% végkoncentrációra állítottuk be. Minden egyes vizsgálatunkban 5 p\ csikó-szérumot adtunk 108 ml fenti pufferoldathoz, s így alapos átkeveríssel olyan végkoncentrációra állítottuk be, hogy 216 térfogatrész pufferoldat 0,01 térfogatrész szérumot tartalmazott. A hígított latex 1 cseppjét az 1. példában leírt módon 1, 2 vagy 3 csepp hígított szérummal kevertük. Az így kapott kísérleti eredményeket az 5. táblázat tartalmazza. 55 5. táblázat ,7.,, , . „ A hozzáadott szérum mennyisége (Ríl»-méréssc’,) 60 900 x 2=1800 1 csepp: az agglutináció pozitív 370x2= 740 I csepp: az agglutináció kérdéses 2 csepp: az agglutináció pozitív 200x2= 400 1 csepp: az agglutináció negatív 2 csepp: az agglutináció pozitív 65_______________________________________________ 5
