186767. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bőrgyógyászati rendellenességek kezelésére alkalmas gyógyszer előállítására
186.767 2 4) Nitrit4iasznosítás:nem hasznosítja. 5) Az etilainin-hidroklorid hasznosítása:nem hasznosítja. 6) Glukozid-bontás. az arbutin tesztben elbontja. 7) keményítő-szerű termékek képzése: nem képződik. 8) Pigment-képzés: nem képződik. 9) Észter-képzés : képződik. 10) Iakmusz-tej reakció: nem koagulálja. 11 ) Vitamin -igény : nem igényel. 12) Sótűrés: Kritikus koncentráció 6-8 súly%. 13) Optimális hőmérséklet: 25 °C. 14) Optimális pH érték: 5,0. 15) Karbamid-bontás:nem bontja. 16) Növekedés 50%-os (súly%) glukóz-agaron vagy 60%-os (súly%) élesztökivonat-agar táptalajon: nincs növekedés. 17) Növekedés 37 °Con: nincs növekedés. 18) Savképzés glukózból: nem képez. 19) Ciklohexiinid-tűrés: ellenálló. 20) Olaj- és zsírbont ás: elbontja. (4) Más mikológiái jellemzők: 1 ) Illatanyag képzése : A jelen törzset egy illatanyag-komponens képzése jellemzi. A gázkromatográfiás vizsgást eredményei arra mutatnak, hogy az illat-komponens főként etanolt, etil-acetátot, izopropil-alkoholt, izopropilaoetátot, izobntilalkoholt, izobutilaoetátot, izoamilalkoholt és izoamilacetatot tartalmaz. Az illat az ún. almaállat. Az ismert élesztőkkel szemben a jelen törzset olyan illatanyag-termelő képesség jellemzi, amelynek alapján nemcsak a magasabb alkoholok, hanem ezek észtereinek termelési hányada is nagy. Ezeknek a közömbös illatanyag-komponenseknek a termelése a következő optimális feltételek mellett megy végbe. a) |Kiindulási pH-érték 4,0—5,0 és alacsony pH érték fenntartása a fermentáció folyamán. b) össznitrogén-koncentrádó 400-500 mg/1 tenyészfolyadék. Szervetlen nitrogén forrásként előnyösen ammóniumszulfátot, ammóniumnitrátot és ammóniumkloridot, szerves nitrogén-forrásként pedig előnyösen élesztőkivonatot, kazaminosavat [„Casamino Acids” (Difco Laboratories)] és peptont használunk. Jó eredményeket érhetünk el továbbá aminosavak — leudn, izdeudn, valin és fenilalanin adagolása esetén. c) A szénforrások kiválasztása. Megfelelően alkalmazható a glukóz, galaktóz, etanol és a glicerin. Előnyösen 5%-os szacharid koncentrádót állítunk be. d) Inokulálási arány: 1—2%. e) Tenyésztési hőmérséklet: 25—30 °C. Előnyben részesítjük a stadonárius tenyésztési módot, 2) Szerves sav képzés: A glukózból hangyasav, propionsav, n-vajsav, borostyánkősav és dtromsav képződik. A mellékelt ábrák a találmány keretében alkalmazott Trichosporon Kashiwayama törzs növekedését mutatják be burgonyakivonat-agar táptalajon, 25 °C- on 3 napon át végzett felületi tenyésztés után. Az 1. ábra egy mikroszkópos felvétel (75-szörös nagyítás), amely a hifa-sejtekből származó artrospórák adhéziós helyzeté! mutatja be.aerób körülmények között. Az 1. ábrából látható, hogy az artrospórák nem tapadnak hozzá a konidiofórokhoz, hanem a hlfa-sejtek válaszfal-kör üli szakaszaiból oldatirányban, láncokban terjednek ki. A 2. ábra egy nagyított mikroszkópos felvétel (300-szoros nagyítás), amely az artrospórákat mutatja be. A 3. ábra egy mikroszkópos felvétel (300-szoros nagyítás), amely a sejteket és csírázási állapotukat mutatja be anaerób feltételek mellett. A bőrgyógyászati megbetegedések kezelésére al: kalmas gyógyszernek a találmány szerint a Trichosporon kashiwayama törzs felhasználásával történő előállítása során a szokásos élesztő-tenyésztési táptalajok alkalmazhatók. Az egyik kitüntetett foganatosítás! mód szerint a rázatásos vagy a stadonárius tenyésztést 20-30 °C-on végezzük, kb. 24 órán át, szilárd vagy folyékony tápközeg alkalmazásával, amely - súlyszázalékban — 0,3% glukózt, 0,5% lefölözött tejet és 0,05% élesztőkivonatot tartalmaz és amelynek pH értéke 4,0-6,0. A kapott fermentádós termékkel, mint inokulummal ugyanilyen összetételű tápközeget oltunk be és a stadonárius vagy rázatásos tenyésztést 3—7 napon át 20—30 °C-on végezzük. A fermentlevet a szokásos módon szűrjük és belőle a sejteket — például membránszűrő alkalmazásával - eltávolítjuk, majd a sejtmentes felülúszót - például csökkentett nyomáson — betöményítjük, előnyösen 4—25 töményítési arányban. A kapott kónix ntr át umot a szokásos módon sterilizáljuk és szobahőmérsékleten vagy hűtőszekrényben tároljuk. Példaként az 1. táblázatban mutatjuk be egy, a találmány szerint előállított sejtmentes felülúszó tulajdonságait. 1. táblázat A jelen törzs fermentádós terméke felüluszójának sejtmentes tisztított szűrlete kismennyiségű aminosavat, szacharidot és lipidet tartalmaz. Ha a szürlet összetételét kvantitative meghatározzuk, megállapítható, hogy össznitrogén-tartalma 0,005—0,015 % és ossz-foszfor tartalma 0,004-0,014%. 1) Külső megjelenés és állag: A szűrlet színtelentől enyhén sárgásig terjedő színű átlátszó folyadék, a melynek enyhe illata van. 2) Azonosítási próbák: (1) 200 ml szűrletet vízfürdőn bepárolunk.amíga térfogat kb. 50 mi re csökken. Ezután 1 ml minhidrin teszt-oldatot adunk a koncentrátumhoz. Ha a keveréket 30 percen át hevítjük, a folyadék ibolyaszínűvé válik. (2) Az (1) pont szerinti bepárlással kapott koncentrátumhoz 5 ml salétromsavat adunk és ? keveréket 20 percen át forraljuk. A keveréket lehűlés után 10%-os nátriumhidroxid-oldatíal semlegesíti ük. Ezután 2 ml ammóniummolibdát teszt-oldatot adunk a keverékhez. Ha a keveréket hevítjük, a folyadék sárgás színűvé válik. Ha 10%-os nátriumhidroxid-oldátot adunk a folyadékhoz, az elszíntelenedik. (3) 5 ml szűrle thez 10 mg indolt és 2 ml sósavat adunk és a keveréket erőteljesen rázzuk. Ha ezután a keveréket 10 percen át hevítjük, a folyadék vörös színűvé válik. 3) Fizikai tulajdonságok: (1) Fajsúly (d?!): 1,000-1,015 (2) Törésmutató (nf)5): 1330-1340 (3) pH (25 uC):43- 53 4) Bepárlási maradék: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
