186734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek enzimatikus előállítására
1 186 73l 2 A 4. ábrából megállapítható, hogy a kitermelés nagymértékben független a valin-amid-koncentrációtól, ellentétben az 1D ábrával, ahol a kitermelés a valin-koncentrációtól (már az ekvimoláris vagy a szubsztrát koncentrációnál magasabb koncentrációknál) függött. A 4A ábrából látható, hogy a valin-amidnak megfelelő pH-tartomány 9-ig terjed és 9,8-nél van egy éles felső határ, ahol a kitermelés erősen esik. A 3. és 4. példákban leírtakhoz hasonló módon állítottuk elő a 11. táblázatban szereplő peptideket a már említett kiindulási anyagokból. A kísérleteket az alábbi paraméterek mellett végeztük: 4,5 mólos CPD-Y, pH 9,6 5 és 35 °C, valamint a szubsztrát-koncentrációí a táblázatban leírtuk. il. táblázat Karboxípeptidáz-Y-nal katalizált pepődszintézis aminosav amidokkal, mint amin-komponensekkel Szubsztrát (konc.) .. ■ \ '__ . . . Amin-komponens (konc.) Termék Kitermelés %-ban Bz-Ala-OMe Glicin-amid 0.3 mól) Bz-Ala Gly-NH2 90 (55 mmól) Szcrin-amid (0,3 mól) Bz-Ala-Ser-NH2 90 Valin-amid (0,4 mól) (4. példa) Bz-Ala-Val-NHj 95 b) Leucin-amid (0,3 mólj Bz-Ala-Leu-NHz 85 Melionin-amid (0,6 mól) Bz-Ala-Met-NH2 95 Fenilalanin-amid (0,3 mól) Bz-Ala-Phe-NH2 90 b) Tirozin-amid (0,6 mól) Bz-Ala-Tyr-NHî 90 Aszparagin-amid (0,3 mól) Bz-Ala-Asn-NHj 80 Proiin-amid (0,3 mól) Bz-Ala-Pro-NH2 0 Glutaminsav-amid (0.25 mól) Bz-Ala-Glu-NHj 0 Hisztidin-amid (0,2 mól) Bz-Aln-His-NH2 89 Treonin-amid (0,2 mól) Bz-AIa-Thr-NHj 88 Z-Phe-OMe Vaiin-amid (0,5 mól) Z-Phe-Val-NH2 97 b) (55 mmól) Szerin-amid (0,4 mól) Z-Phe-Ser-NH2 60 Tirozin-amid (0,4 mól) Z-Phe-Tyr-NH2 64 Bz-Phe-Gly-OMe (30 mmól) Valin-amid (0,4 mól) Bz-Phe-Gly-Val-NH2 90 Z-Phe-Ala-OMe (20 mmól) Valin-amid (0,4 mól) Z-Phe-Ala-Val-NHj 90 b) Z-Phe-A!a-OMe Glicin-amid (0.4 mól) Z-Phe-Ala-Gly-NHj 95 (20 mmól) Hisztidin-amid (0,4 mól) Z-Phc-Ala-His-NHj 50 Z-Leu-Gly-Gly-OEt (10 mmól) Valin-amid (0,4 mól) Z-Lcu-Gly-Gly-Val-NHí 80 Bz-Tyr-OEt Valin-amid (0,25 mól) Bz-Tvr-VaI-NH2 94 (50 mmól) Glicin-amid (0,55 mól) Bz-Tyr-Gly-NHZ 82 Z-Ala-OMe Leucin-amid (0,15 mcl) Z-Ala-Leu-NH2 90 (10 mmól) Glicin-amid (0.15 mól) Z-Ala-Gly-NH2 20 Bz-Arg-OEt (75 mmól) Tirozin-amid (0.2 mó!) nz-Arg-Tyr-NH2 52 Bz-Tyr-OEt Valin-amid (0.25 mól) Bz-Tyr-Val-NHZ 94 (50 mmól) Glicid-amid (0.55 mól) Bz-Tyr-Gly-NH2 82 Z-Pro-OMe (50 mmól) L.eucin-amid (0,25 mól) Z-Pro-Leu-NH2 0 10
