186734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek enzimatikus előállítására
1 ! Hó 734 2 XII. táblázat Az N-termináiis védőcsoportokka! rendelkező és nem rendelkező peptid-észter szubsztrátok összehasonlítása a karhoxipeptidáz-Y által katalizált peptidszintézis során Szubsztrát (konc.) Amin-komponcns (konc.) Termék Kitermelés %-ban Ac-AIa-Ála-AIa-OMe (50 mmól) Leucin-amid (0,15 mól) Ac-Ala-Ala-A!a-Leu-NH2 90 Alá-Ala-A la-OMe (50 mmól) Leucin-amid (0,15 mól) Ala-A!a-Ala-Leu-NH2 75 16 példa Szerves oldószerek jelenlétében végzett szintézis Az 1., 2., 3. és 4. példákban leírtakhoz hasonló módon állítottuk elő a XIII., XIV. és XV. táblázatokban felsorolt peptideket, a már korábban ismertetett kiindulási anyagokból és a szerves oldószerek megadott koncentrációi mellett. A reakció főbb jellemzői: 50 mmól szubsztrát, 5 nmól CPD-Y, pH = 96 és 30 °C. XIII. táblázat Karboxipeptidáz-Y-nal katalizált peptidszintézis 50 mmól Bz-Ala-OMe szubsztrát és szabad aminosav mint amin-komponens felhasználásával, 20 % metanollal vagy anélkül, KCl-re 0,1 mólos, EDTA-ra 1 mmólos oldatban Amin-komponens Termék Kitermelés %-ban (konc.) McOH-val MeOH nélkül Valin (0,6 mól) Bz-Ala-Val-OH 53 42 Threonin (1,2 mól) Bz-AIa-Thr-OH 61 52 Fenilalanin (0,16 mól) Bz-Ala-Phe-OH 18 16 Leucin (0,16 mól) Bz-AIa-Leu-GH 39 33 Metionin (0,6 mól) Bz-Ala-Met-OH 64 42 Glicin (3,0 mól) Bz-A!a-Gly-OH 50 55 Szerin (3,2 mól) Bz-Ala-Ser-OH 52 50 Lizin (1,5 mól) Bz-Ala-Lvs-OH 41 53 Glutaminsav-y-t-buti lészter Bz-Ala-Glu-(y-OBut)-OH 55 54 (1,0 mól) Aszparagin (0,6 mól) Bz-Ala-Asn-OH 14 18 XIV. táblázat Bz-Ala-Thr-OH karboxipeptidáz-Y-nal katalizált szintézise 50 mmólos Bz-Ala-OMe-bő! és treoninból a polietilénglikoI-300 (PEG-300) különböző koncentrációi mellett Főbb reakciójellemzők: 4 /rmól CPD-Y, pH = 9,6 és 25 °C 0,1 mól KCI-ben Trconin Bz-Ala-Thr-OH PEG-300 %-a koncentráció kitermelés %-ban 0 0,7 mól 36 10 0,7 mól 34 20 0,7 mól 31 30 0,7 mól 29 40 0,35 mól 28 17
