186734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek enzimatikus előállítására
1 186 734 2 X. táblázta Karboxipeptidáz-Y-nai aktivált peptidszintézis különböző amínosav-származékokkai, mint amin-komponensekkel Szubsztrát (konc.) Amin-komponcns (konc.) Termék Kitermelés %-ban Bz-Ala-OMe jS-alanin-amid (0,2 mól) Bz-Ala-/3-AIa-NH2 80 (50 mmól) Glicin hidroxámsav (0.2 mól) Bz-AIa-Gly-NH-OH 45 D, L-alanin hidroxámsav (0,2 mól) Bz-Ala-Ala-NH-OH 40 A CP-Î-1 és CP-2-1 elkülönítését L. E. Ray eljárása alapján végeztük és az 1., 2., 3. és 4. példákban leírtakhoz hasonló módon állítottuk elő a XI. táblázatban felsorolt peptideket, a korábban ismertetett kiindulási anyagokból. A reakció jellemző’: 6 p.mól CP-1-1 vagy CP-2-1, pH = 8,0 és 25 °C. XI. táblázat Peptidszintézis csírázó árpából származó CP-l-i és CP-2-1 karboxipeptidázokkal 13. példa Peptidszintézis árpa-karboxipeptidázzal A csírázó árpa, például maláta formájában két különböző peptidázt tartalmaz, melyek elnevezése CP-1-1 és CP-2-1 (Lee E. Ray, Carlsberg Res. Comm. 41, 169- 182, 1976). Szubsztrát Amin-komponens Termék Kitermelés Enzim (konc.) (konc.) % Bz-A!a-OMe Valin-amid Bz-A!a-Val-NH2 43 CP-1-1 (50. mmól) (0,25 mól) Alanin-amid Bz-Ala-Ala-NH2 58 CP-1-1 (0,25 mól) Lizin Bz-Ala-Lys 11 CP-1-1 (1,7 mól) Valin-amid Bz-AIa-Val-NH2 57 CP-2-1 (0,25 mól) Alanin-amid Bz-Ala-Ala-NH2 64 CP-2-1 (0,25 mól) Lizin (1,7 mól) Bz-A la-Lys 11 CP-2-1 14. példa A peptid-amidok karboxipeplidáz-Y által katalizált dezamidálása 15 mmól Bz-A!a-Leu-NH2-re 15 mmólos, KCI-re 0,1 mólos, EDTA-ra és dimetil-formamidra 10 %-os oldatnak 2 ml-éhez 2 mg CPD-Y-t adtunk. A reakció lefutását GPLC módszerével vizsgáltuk cs az. 5. ábrán szemléltetjük. Látható, hogy a Bz-A!a-Leu-NH2 20 perc után teljesen átlakult és kb. 68 %-ban Bz-Ala-Leu-OH, továbbá 32 %-ban Bz-Ala-OH keletkezett. A reakcióelegyből végzett aminosavanalízis azt mutatta, hogy a Bz-Ala-OM főleg a Leu-NH2 lehasadásával képződött 50 a Bz-Ala-Leu-NHj-ből. 15. példa Az N-terminális védőcsoportokkal rendelkező és nem rendelkező peptid-észter szubsztrátok összehasonlítása A 3. és 4. példákban leírtakhoz hasonló módon állí- 60 toltuk elő a XII. táblázatban szereplő peptideket. A reakció jellemzői: 50 mmól szubsztrát, 5 /xmól CPD-Y, pH = 9,5 és 25 °C. 55 16
