186729. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pentapeptid-származékok előállítására
1 J 86 729 2 14. H-Tyr-D-Met(0)-Gly-rhe(4-NOz)-Pro-NHz előállítása 0,56 g BOC-Tyr-D-Met(0)-Gly-Phe(4-NOz)-Pro-NHz védőcsoportjait 56 ml 1 mol/i hidrogén-klorid-oldat, ecetsav elegyben 20 ml anizol jelenlétében eltávolítjuk. A reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten tartjuk, majd a reagenseket vákuumban eltávolítjuk belőle, és a visszamaradó anyagot éterrel eldörzsöijük. Az így kapott nyersterméket 2,5x25 cm-es, karboxi-metü-cellulőzzaf töltött oszlopon kromatografáljuk, eluensként pH = 5,1 -cs lineáris gradiens szerint 0,005 mol/l-ről 0,02 mol/l-re töményedő ammóriium-acetát-oidatct alkalmazunk. A részben tisztított pepiidet karboxi-meíii cellulózzal töltött 2,5 x 50 cm-es oszlopra visszük, melyről pH = 5,1-es, lineáris gradiens szerűit 0,005 mol/l-ről 0,1 mol/l-re növekvő koncentrációjú ammónium-acetát-oldattal eiuáijuk. Az eluátumból az illékony puffert ismételt fagyasztva szárítással eltávolítjuk. Ily módon 91 %-os hozammal 50 mg tiszta pepiidet nyerünk. A pepiid tisztaságát vékonyréteg-kromatográfiásan a 2, 7 és 8 oldószerrendszerben, valamint nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással ellenőrizzük. Elemzési eredmények a C30H39N7O9S .CH3COjH .2,5 HzO képlet alapján: Számított: C % = 50,52, H % = 6,05, N % = 12,89. Talált: C % = 50,59, H % = 5,96, N % = 12,97. 14, példa 0,108 g, az 1. példa szerinti eljárással előállított acctáthoz 1,506 ml (1 ekvivalens) 0,1 n vizes nátrium-hidroxidoldatot, majd 10 ml metanolt adunk. A szabad bázist tartalmazó oldat optikai forgatóképessége: [«$ +19,34°; KJ* + 23,60°. 15. példa 0,1095 g, a 2. példa szerinti eljárással előállított acetát-trihidráíhoz 1,391 ml (1 ekvivalens) 0,1 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot, majd 10 ml metanolt adunk. A szabad bázist tartalmazó oldat optikai forgatóképessége: Md + 17,34°; [«)& + 25,28°. 16. példa Farmakológiái vizsgálatok Az előző példákban előállított pepíidek alább leírt biológiai aktivitását ismert farmakológiai módszerekkel határoztuk meg. A) Analgctikus hatás egereken „hot plate” teszt során. A pepiidet intracerebroventrikuláris injekció formájában alkalmaztuk. 10 B) Antidiarrhoeás hatás patkányokon. A patkányokat 24 órán keresztül éheztettük,ezután a pepiidet szubkután vagy orálisan beadtuk, és 15 perc múlva orálisan 1 mi ricinusolajat adtunk nekik. C) Köhögéscsillapító hatás tengerimalacokon. A tengerimalacoknak orálisan vagy szubkután beadjuk a pepiidet, majd 30 perc múlva 20 % ritromsavat tartalmazó aeroszollal kezeljük őket. A köhögések számát egy ötperces időtartam alatt figyeljük, és kiszámítjuk 6 állatra, D) Analgetikus hatás egereken rángógörcsvízsgálat során. A pepiidet orálisan alkalmaztuk. Az A), C) és D) alatt leírt vizsgálatokat az ezen vizsgálatokra korábban leírt módszerek szerint végeztük, és leírásuk is ugyanazon irodalmi helyeken található meg. A kapott adatokból kiszámítottuk a megfelelő ED» értékeket. NV jelentése nem vizsgáit. Az eredmények az 1. táblázatban láthatók. 17. példa Gyógyászati készítmények előállítása A) Formulázás tabletták formájában (20 mg/tabletta hatóanyagú tabletták): (I) általános képletű vegyület 20 mg Iaktóz 76 mg kukoricakeményítő 10 mg zselatin 2 mg magnézium-sztearáí 2 mg Az (I) általános képletű vegyületet, a laktózt és a kukoricakeményítőt összekeverjük. A zselatin vizes oldatával granuláljuk. A granulátumokat megszárítjuk, hozzáadjuk a magnérium-sztearátot és tablettákká préseljük. 110 mg-os tablettákat kapraik. B) Formulázás szuppozitóriumok alakjában (5 mg hatóanyag-tartalmú szuppozitóriusok): (I) általános képletű vegyidet 250 mg szuppozitóriumbázis (Eszterinum C) 100 g-ig A szuppozitóriumbázisí 40 °C-on megolvasztjuk. Fokozatosan hozzáadjuk a finom por formájú (I) vegyületet, és homogénre keverjük. Megfelelő formákba öntjük (2 g/forma) és állni hagyjuk. Az Eszterinum C kereskedelemben kapható szuppozitóriumbázis, mely telített növényi zsírsavak mono-, di- és trigliceridjeinek degyéből áll. Gyártja a Henkel International, Düsseldorf. C) Pesszárium (5 mg hatóanyag-tartalommal): (I) általános képletű vegyület 5 mg iaktóz 400 mg povidon 5 mg magnázium-sztearát 5 mg összekeverjük a pepiidet és a laktózt. Granuláljuk a povidon 50 %-os vizes etanollal készített oldatával. A granulátumokat raegszárítjuk, hozzáadjuk 3 magnézium-sztearáíot és megfelelő alakúra préseljük. 415 mg-os pesszáriumokat kapunk. C) Fagya: :szárított injekció (100 tng/ampuila): (I) általános képletű vegyület 100 mg steril víz 2,0 ml-ig 5 10 15 20 25 30 35 40 45 5C 55 60 66
