186729. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pentapeptid-származékok előállítására
I 186 729 2 vés fázist elkülönítjük, majd kétszer 20 ml 5 %-os citromsavoldattal, kétszer 20 ml nátrium-hidrogén-karbonátoldattal, végül kétszer 20 ml vízzel mossuk. Ezután az oldatot vízmentes magnézium-szulfáton szántjuk, majd bepároljuk. A kapott amorf szilárd anyagot éterrel eldörzsölve 62 %-os hozammal 1,0 g terméket kapunk. A termék a 2 jelölésű oldószerrendszerben végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat szerint kevés DCU-t is tartalmaz. A terméket nem tisztítjuk tovább. 9. BOC-Tyr-D-Met(0)-GIy-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítása 1,0 g minden funkciós csoportján védett pentapeptidet 150 ml metanolban oldunk, az oldatot sózott jégben lehűtjük és ammóniával telítjük. A lombikot lezárjuk, és az elegyet 6 napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az ammóniát és a metanolt gondosan eltávolítjuk, majd a terméket etil-acetát, éter elegyből kinyerjük. 83 %-os hozammal 0,81 g terméket nyerünk. A termék 2, 7 és 8 oldószerrendszerben végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint DCU-t és kevés kiindulási anyagot tartalmaz. Ezt az anyagot további tisztítás nélkül visszük a következő reakciólépésbe. 10. H-Tyr-D-Met(0)-GIy-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítása 0,81 g BOC-Tyr-D-Met(0)-Gly-Phe(4-N02)-Pro-NH2-t 14 ml anizolban szuszpendálunk és 80 ml 1 mol/1 hidrogén-klorid-oldat, ecetsav eleggyel kezeljük. A reagáltatást szobahőmérsékleten 45 percen át folytatjuk, majd a reakcióelegyet szárazra pároljuk és a visszamaradó anyagot éterrel eldörzsöljük. A kapott nyersterméket 2,5x25 cm-es oszlopba töltött karboxi-metil-cellulóz gyantán ioncserélő kromatográfiás eljárással tisztítjuk. A lineáris gradiens eluálást pH 5,1-es 0,005- 0,2 mol/1 ammónium-acetáttal végezzük. 0,33 g terméket nyerünk, mely mind vékonyréteg-kromatográfiás, mind nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással vizsgálva tisztának bizonyul. Elemzési eredmények a C30H39N7O9S .CH3C02H .H20 képlet alapján: Számított: C % = 51,13, H % = 6,00, N % = 13,05. Talált: C % = 50,83, H % = 6,06, N % = 12,91. 13. példa H-Tyr-D-Met(0)-Gly-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítása A kívánt termék előállításának vázlatát az 5. ábrán mutatjuk be. A 12. példa 5. reakciólépésében előállított BOC-Tyr-D-Met(0)-Gly-t és a 6. lépésben előállított B0C-Phe(4-N02)-Pro-0Me-t a következő eljárásai alakítjuk a kívánt termékké. 11. BOC-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítása 22,9 g, a 6. reakciólépés szerint előállított BOC-Phe(4-N02)-Pro-OMe-t 250 ml metanolban oldunk, és az oldatot jégbe hűtjük, majd ammóniát buborékoltatunk át rajta, míg telítetté nem válik. Ezután a lombikot lezárjuk és szobahőmérsékleten 7 napig állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután vákuumban bepároljuk, és az így kapott nyersterméket etil-acetátból kristályosítjuk. A kapott termék mind vékonyréteg-kromatográfiás, mind nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat alapján tisztának bizonyult. A termék fizikai jellemzői: Olvadáspont: 176-178,5 °C; [«jile -29,4° (c = MeOH); [a]ÍU -35,7° (c = 1, MeOH). Elemzési eredmények a CigH26N408 képlet alapján: Számított: C % = 56,16, H % = 6,40, N % = 13,79. Talált: C % = 55,60, H % = 6,33, N % = 14,04. 12. H-Phe(4-N02)-Pro-NH2-HCl előállítása 8,0 g BOC-Phe(4-N02)-Pro-NH2-t 20 ml metanol, 40 ml izopropil-alkohol és 375 ml etil-acetát elegyében oldunk. Az oldatot jégbe hűljük, majd hőmérsékletét 15 °C-on tartva 1 órán át száraz hidrogcn-klorid-gázt buborékoltatunk át rajta. Ezután a reakcióelcgybe nitrogéngázt vezetünk 5 percen át, majd az elegyet 450 ml száraz éterrel meghígítjuk. A kapott terméket kiszűrjük, éterrel gondosan kimossuk, majd vákuumban, foszfor-pentoxid és nátrium-hidroxid fölött szárítjuk. 93 %-os hozammal 6,28 g terméket nyerünk. A termék fizikai jellemzői: Olvadáspont: 156-159 °C; [aß4'5-13,5° (c= 1, MeOH); [a]§&5 -15,3° (c= 1, MeOH). 13. BOC-Tyr-D-Met(0)-Gly-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítása 1,0 g, az 5. reakciólépés szerint előállított BOC-Tyr-D-Met(0)-Gly-t 20 ml DMF-ban oldunk, és az oldatot -25 cC-ra hűtjük, majd erőteljes keverés közben, a hőmérsékletet -15 °C-on tartva 2 perc alatt 0,21 g NMM-t és 0,28 g izobutil-klór-formiátot adunk hozzá. Ezután 0,71 g Phe(4-N02)-Pro-NH2-HCI és 0,33 g NMM előzetesen -25 °C-ra lehűtött oldatát adjuk az elegyhez, és -15 °C-on 2,5 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet jégfürdőbe visszük át és 2,5 ml 2 mol/1 kálíum-hidrogén-karbonáttal 30 percig kezeljük. Az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a visszamaradó anyagot 270 ml etil-acetát és 40 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist elkülönítjük és kétszer 40 ml 5 %-os citromsavcldattal, kétszer 40 ml 5 %-os nátrium-hidrogén-karborát-oldattal, végül kétszer 40 ml vízzel mossuk. Az extraktumot szárítjuk, szárazra pároljuk, majd a maradékot éterrel eldörzsöljük. 35 %-os hozammal 0,56 g terméket nyerünk. Az így kapott anyagot további tisztítás nélkül visszük a következő reakciólépésbe. 5 10 15 20 25 30 '35 40 45 50 55 60 65 9
