186729. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pentapeptid-származékok előállítására
1 186 729 2 3. BOC-Try-D-Met-GIy-OMe előállítása 16,59 g BOC-Tyr-t 80 ml THF-ban oldunk és az oldatot -25 °C-ra hűtjük. 5,96 g NMM-t, majd 7,69 g izobutil-klór-formiátot adunk hozzá gyors keveréssel. Az elegyet 2 percig -15 °C-on tartjuk, majd 13,77 g Ü-Met-Gly-OMe-HCl és 5,42 g NMM go ml DMF-ben készült, -15 °C-ra előhűtött oldatát adjuk hozzá, majd az elegyet -15 °C-on 2,5 órán át keverjük. Ezután az elegyet jégfiirdőbe helyezzük és 65 ml 2 mol/1 kálium-hidrogén-karbonát-oldattal 30 percig kezeljük. Ezután az oldószereket vákuumban eltávolítjuk és a visszamaradó anyagot 360 ml etil-acetát és 70 ml víz elegyében oldjuk. A szerves fázist elkülönítjük és kétszer 50 ml .5 %-os citromsavval, kétszer 50 ml 5 %-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül kétszer 50 ml vízzel mossuk. Ezután az oldatot vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk és eltávolítjuk belőle az oldószert, majd a visszamaradó szilárd anyagot éterrel eldörzsöijük. Ily módon 81,6 %-os hozammal 21,16 g védett tripeptidet nyerünk, mely termék 2, 7 és 8 jelölésű oldószerrendszerben végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal tisztának bizonyult. 4. BOC-Tyr-D-Met-G!y előállítása 21,1 g, az előző lépésben nyert védett tripeptidet 350 ml metanol és 150 ml víz elegyében oldunk és 55 ml 2 mol/1 nátrium-hidroxidda! elszappanosítjuk. A reakció lefolyását 7 jelölésű oldószerrendszerben végzett vékonyréteg-kromatográfiás eljárással nyomon követve, 45 perc elteltével a reakciót befejezettnek találtuk. Ezután a metanolt vákuumban eltávolítjuk az elegyből, és a visszamaradó vizes oldatot jégbe hűtve 110 ml 1 mol/1 hidrogén-klorid-oldattal semlegesítjük. A kiváló csapadékot kiszűrjük, néhányszor vízzel mossuk, majd foszfor-pentoxidon szárítjuk. 98 %-os hozammal 20,18 g terméket nyerünk. A termék 2, 7 és 8 jelölésű oídószerrendszerben végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat során egyetlen foltot ad. Elemzési eredmények a C21H31N307S képlet alapján: Számított: C % = 53,73, H % = 6,61, N % = 8,96. Talált: C % = 53,55, H % = 6,62, N % = 8,76. 5. BOC-Tyr-Z>-Met(0)-Gly előállítása 5,48 g BOC-Tyr-D-Met-Gly-t 120 ml metanolban oldunk, majd 2 ekvivalens hidrogén-peroxiddal - ez 2,7 ml 29,4 %-os hidrogén-peroxid-oldatnak felel meg - kezeljük. A reakció lefolyását nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással követjük nyomon. 20 perces szobahőmérsékleten végzett reagáitatás után az elegyet szárazra pároljuk, majd a visszamaradó anyagot éterrel eldörzsöljük. 96,5 %-os hozammal 5,46 g terméket nyerünk, mely 186-188 cC-on bomlás közben olvad. Egyéb fizikai jellemzői: faj”'5 + 1,0° (c = 1, DMF); H”>E + 1,3° (c = 1, DMF). 8 Elemzési eredmények a C2iH3iN308S képlet alapján: Számított: C% = 51,96, H % = 6,39, N % = 8,66. Talált: C % = 52,13, H % = 6,38, N % = 8,53. 6. BOC-Phe(4-N02)-Pro-OMe előállítása 31,0 g B0C-Phe(4-N02)-t 150 ml DMF-ban oldunk, 27,0 g HOBT-t adunk hozzá és az elegyet -5 °C-ra hűtjük, majd 20,6 g DCCl-et adunk hozzá. A reakcióelegy hőmérsékletét 30 percig -5 °C-on tartjuk, majd 16,55 g Pro-OMe-HCl és 10,1 g NMM 30 ml DMF-ban készült oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 20 órán át 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a DCU-t kiszűrjük belőle. A szűrletet vákuumban bepárolva olajos anyagot kapunk. Ezt az anyagot 1500 ml etil-acetátban oldjuk, majd kétszer 250 ml 5 %-os citromsavoldattal, kétszer 250 ml r.átrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd kétszer 250 mi félig telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Ezután a szerves fázist szárítjuk, majd 500 ml-re bepároljuk. A reakcióelcgyből a DCU-t kiszűrjük és a szűrietet bepároljuk. Ily módon gumiszerű anyagot kapunk, melyet fizikai adatokkal nem jellemeztünk. 7. H-Phe(4-N02)-Pro-OMe-HC! előállítása 21,41 g védett dipeptidet 300 ml ctil-acetátban oldunk és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Ezután a hőmérsékletet változatlanul 0 ’C-on tartva 45 percen át száraz hidrogénklond-gázt vezetünk az oldatba. Ezt követően az oldatot 50 ml-re bepároljuk és 300 ml száraz éterrel meghígítjuk. Az elegyet hűtőszekrényben hűtjük, majd a csapadékot kiszűrjük, száraz éterrel gondosan átmossuk, majd foszfor-pentoxid és nátrium-hidroxid felett szárítjuk. 85 %-os hozammal 15,65 g terméket nyerünk. A termék fizikai jellemzői: Olvadáspont: 145-148 °C. laffi* -15,7° (c = Î, MeOH). [a]”’5 -17,6° (c = MeOH). Elemzési eredmények a C15H20N3GsCi képlet alapján: Számított: C % = 50,35, H % = 5,59, N % = 11,75. Talált: C % = 50,03, H % = 5,81, N % = 11,45. 8. BOC-Tyr-ü-Met{0)-Gly-Phe(4-N02)-Pro-OMe előállítása 1,0 g BOC-Tyr-D-Mel(0)-Giy 30 ml DMF-ban készült oldatát -5 °C-ra hütjük, majd 0,56 g HOBT-!al és 0,42 g DCCl-de! kezeljük. Az elegyet -5 °C-on 40 percig keverjük, majd 0,74 g Phe(4-N02)-Pro-OMe-HCl és 0,21 g NMM 5 ml DMF-ban készült oldatát adjuk hozzá és a kondenzálási reakciót 5 °C hőmérsékleten 20 órán át végezzük. Ezután a DCU-t kiszűrjük az elegyből és a szűrietet vákuumban bepároljuk. A kapott nyersterméket iOO ml etii-acetát és 20 m! víz között megosztjuk. A szer5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
