186686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11béta-klór-delta15-szteroidok és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkész előállítására
1 186 686 2 a pilulák, továbbá a szuszpenziók és az oldatok jönnek tekintetbe. Parenterális alkalmazásra elsősorban az olajos oldatok, mint például a szezámolajjal vagy ricmusoiajja! készített oldatok jönnek szóba, ezek adott esetben még valamilyen hígítószert, így például benzil-benzoátot vagy benzil-alkoholt is tartalmazhatnak. A hatóanyag koncentrációja az alkalmazási módtól függ, így például az orális alkalmazásra szolgáló tabletták előnyösen 0,01 — 0.5 ing hatóanyagot, míg a parenterálisan alkalmazható oldatok előnyösen 1—100 mg/ml hatóanyagot tartalmaznak.. A találmány szerinti gyógyszerkészítmények adagolása a gyógyszerformától és a gyógyszerbeadás céljától függően változhat. így például a napi kontraceptív dózis orális alkalmazás esetén 0,01-0,5 mg az új gesztagénbői, amit adott esetben 0,01-0,05 mg etiniiösztradiollal kombinálhatunk. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott II általános képletű kiindulási vegyületeket 1 l/l-klór-18-meti) 4-ösztrén-3,17-dionbói (7209299 számú holland közzétételi irat) kiindulva, az alábbiak szerint lehet előállítani: 11 fí-KIór-15 a-hidroxi-1 8-metil-4-ösztrén-3,17-dion 3,0% glükózt, 1,0% kukoricalekvárt, 0,2% nátriumnitrátot, 0,1% kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,2% dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,05 % magnézium-szulfát — víz (l/7)-et, 0,002% vas(II)-szulfát - víz (l/7)-et és 0,05% kálium-klorid.ot tartalmazó, előzetesen autoklávban 120 °C-on 30 percig sterilizált tápoldatból 500 ml-t beadagolunk egy 2 literes Erlenmayer-lombikba, majd azt a Pénicillium raistrickíi törzs (ATCC 10 490) ferdecsöves tenyészetével beoltjuk és ezt követően két és fél napon át 30 °C hőmérsékleten egy forgó rázóberendezéssel rázatjuk. A fentivel azonos összetételű, előzetesen 123 °C-oa és 1,1 atü nyomáson sterilizált táptalajból 15 liternyit elhelyezünk egy 20 literes ciőfermentorba és azt a fenti előtenyésztési eljárással kapott előtenyészet 250 mijével beoltjuk Ezután habzásgátló szerként Silicon SH-t adunk hozzá és a fermentálást 29°C-on, 0,7 atü nyomású levegővel végzett levegőztetés (15 liter/perc) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át lefolytatjuk. Ezután a fentiek szerint kapott előtenyészetből steril körülmények között kiveszünk 0,9 litert és ezzel beoltjuk a 20 literes főfermentort, amely az előfermentálásnál már ismertetett összetételű és azonos módon sterilizált 14 liter táptalajt tartalmaz. Az előfermentálásnál alkalmazott körülményekkel azonos módon végzett, 12 óráig tartó növekedési szakasz után 130 ml dimetii-formamidbau oldott 2,6 g 1 l/3-klór-18-metil-4-ösztrcn-3,17-diont adunk a fermentációhoz, majd azt továbbkeveijük és levegőztetjük. A fermentáció előrehaladását úgy ellenőrizzük. hogy időnként mintákat veszünk belőle, ezeket metil-ízobutil-ketonnal extraháljuk és vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatnak vetjük alá. 14 órás kontaktidő után a szubsztrátum átalakulása befejeződik. A tenyészlevet ezután szűrjük és a szürietet három ízben, alkalmanként 10 liter mctil-izobutil-ketoniinl extraháljuk. Hasonló módon metil-izobutii-ketonnal extraháljuk a micéliumot is. A kivonatokat egyesítjük és az oldatot előbb keringető bepárlóban betöményítjük, majd egy forgó bepárlóberendezésben 50 °C fürdőhőmérsékleten vákuum alatt szárazra pároljuk. A kapott olajos-kristályos maradékot tisztítás céljából szilikagéloszlopon kromatografáljuk, az eluálást növekvő mennyiségben acetont tartalmazó metilén-dikloriddal (5 liter metiién-diklorid,13,5 liter metilén-diklorid + 1,5 liter aceton) végezzük. A főfrakciót (2,28 g) végül metilén-diklorid - izopropil-éter elegybőí átkristályosítjuk. így 1,8 g tiszta llß-klor-lSahidroxi-I8-metil-4-ösztrén-3,17-dicnt kapunk, melynek olvadáspontja 169—170 °C. 15a-A cetoxi-11 ß-kl0r-18-meCil-4-ösztren-3,17-dion 5 ml piridinben levő 1,6 g ll/?-k!ór-15a-hidroxi-18- metiM-ösztrén-3,17-diont szobahőmérsékleten 1,2 ml ecetsavanhidriddel keverünk argongáz alatt. 18 órai reagáltatás után az oldatot sósavat tartalmazó jég—vízkeverékre öntjük. A kivált terméket leszívatjuk, etil-acetátbar. oldjuk és vízzel mossuk. A nyers terméket diizopropil-éterből átkristályosítjuk. Ily módon 1,0 g 15aacetoxi-1 10-kIór-l8-metil-4-ösztrén-3,17-diont kapunk, melynek olvadáspontja 125,0 C. 15 a-Acetoxi-llß-klör-3,3-(2',2'-dimetil-trimetiléndioxi)-18-metil-5-ősztrén-17-on 13 ml metilén-dikloridban és 1,3 ml ortohangyasavtrietilészterben levő 1,3 g 15a-acetoxi-l lß-kl0r-18-metil-4-ösztrén-3,17-dionhoz szobahőmérsékleten 2,5 g2,2-dimetíl-1,3-propándíolt és 15 mg p-toluolszulfonsavat adunk. 7 óra múlva az elegyet metilén-dikloriddal hígítjuk, majd nátrium-hidrogén-karbonát-oldattai és vízzel mossuk, ezt követően szárítjuk. A nyers terméket szilikagéh;.n, hexán-aceton (0% —20%) eleggyel kromatografáljuk. így 800 mg 15a-acctoxi-l lß-klor-3,3-(2',2'-dimeti!-trimetilén-dioxi)-18-metil-5-ösztrén-17-ont kapunk, melynek olvadáspontja 191,5 °C. 11 ß-Kl6r-3,3-( 2’ ,2 '-dimeiil-trimetilén-dioxi j- 18-meiil-5,15-ösztradién-l 7~on 600 mg 15a-aceíoxi-I lß-klör-3,3-(2',2'-dimetil-trimeti!én-dioxi)-18-metil-5-ösztrén-17-ont 15 ml dioxánban szobahőmérsékleten keverés közben 1 ml 1,5-diaza-biciklof5,4,0]-undec-5-énnel reagáltatunk. Másfél óra múlva az oldatot jeges vízre öntjük és a kivált terméket leszívatjuk, ezt etil-acetátban oldjuk és vízzel mossuk. A nyers terméket szilikagélen hexán-aceton (0% — 20%) eleggyel kromatografáljuk és így 300 mg 1 lß-klor-3,3- (2 ,2 ’-dimelil-trimctílén-díoxi)-18-metíl-5,15-ösztradíén 17-ont kapunk, ami 144,4 °C-on olvad. 11 ß-Kl0r-18-metil-4,l5-ösztradien-3,l 7-dion 300 mg 1 Iß-klör-S^-fl’^’-dimetil-trimetilen-dioxi)i8-meti!-5,!5-ösztradién-17-ont 10 ml acetonban 0,2 ml fáiig tömény sósavval szobahőmérsékleten keverünk. 45 perc múlva a reakcióelcgyet nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal semlegesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, az oldatot vízzel mossuk és nátrium-szulfát fölött szárítjuk. A nyers terméket aceton-hexán-elegybői átkristályosítjuk és így 120 mg 1 l(3-klór-18-metil4,15-ösztradién-3,17-diont kapunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
