186375. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin-származékok előállítására
3 186375 4 A találmány tárgya eljárás új, fájdalomcsillapító hatást mutató enkefalin-származékok előállítására. A közelmúltban emlősök agyából és agygerincvelői folyadékából morfinszerű tulajdonságokkal rendelkező endogén anyagokat vontak ki. E vegyületeket enkefalinoknak nevezik, szerkezetüket Hughes és munkatársai [Nature 258, 577 (1975)] derítették fel, eszerint az enkefalinok az alábbi összetételű pentapeptidek : H-T yr-Gly-Gly-Phe-Met-OH H-T yr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH. E két vegyületet metionin-enkefalinnak, illetve leucin-enkefalinnak nevezik. Habár kimutatták, hogy a metionin-enkefalin és a leucin-enkefalin fájdalomcsillapító hatást mutat, ha egerek agykamrájába adjuk be őket [Buscher és munkatársai, Nature, 261, 423 (1976)], gyakorlatilag mégis használhatatlanok, mivel parenterálisan (a gyomor- és bélrendszer megkerülésével) adagolva nincs fájdalomcsillapító hatásuk. Ezért az enkefalinok felfedezése óta sok új enkefalin-analógot állítottak elő, abban a reményben, hogy hatásuk nagyobb lesz, és hogy parenterális vagy orális (szájon át) adagolás esetén biológiai hozzáférhetőségük (bioavailability) révén a gyakorlatban is alkalmazhatók lesznek. Dutta és munkatársai, Life Sciences 21, 559—562 (1977) leírtak bizonyos szerkezeti változtatásokat, amelyek szerintük megerősítik az új származékok biológiai hatását. Szerintük az enkefalin-származékok hatását az alábbi szerkezeti változtatások egyikének vagy összességének bevezetésével lehet felerősíteni : a) A 2-es helyen levő glicin helyettesítése bizonyos D vagy alfa-aza-aminosavakkal ; b) a terminális karboxilcsoport átalakítása metilészterré vagy amiddá ; c) a 4-es helyzetben levő fenil-alanin módosítása alfa-aza helyettesítéssel, N-metilezéssel vagy az aromás gyűrű hidrogénezésével. Ezenkívül Roemer és munkatársai, Nature 268, 547—549 (1977) azt javasolják, hogy az 5-ös helyzetben levő metionint a megfelelő karbinollá kell átalakítani, és a metioninban szereplő kénatomot S-oxiddá (szulfoxiddá) kell oxidálni. Egy további jelentős szerkezeti változtatást ismertet a 859 026. számú belga szabadalmi leírás. Eszerint az enkefalin-származékok hatását és biológiai hozzáférhetőségét azzal lehet megnövelni, ha a 2-es helyzetbe egy D-aminosavat iktatnak be, a terminális karboxilcsoportot amiddá alakítják, és az 5-ös helyzetben levő aminosavat N-alkilezik. Felfedeztük az enkefalin-analógoknak egy olyan családját, amely erős fájdalomcsillapító hatást mutat. Ezen analógok halogénezett enkefalin-származékok, amelyek nagymértékben specifikusak mind a halogénatom anyagi minőségét, mind pedig a halogénatom helyzetét tekintve. Az alábbi I általános képletű vegyületek olyan pentapeptidek, amelyekben a peptidlánc 4-es helyzetében p-fluor-helyettesített L-fenil-alanin van. Az irodalomból ismeretesek más, halogénezett 4 fenil-alanil-enkefalin-analógok ; ezek közül azonban egyik sem mono-p-fluor-helyettesített 4-fenil-alanil-enkefalin-analóg. A. R. Day és munkatársai [Res. Comm. in Chem. Path, and Pharmacol. 14 (4), 597—603 (1976)] leírja a H-Tyr-Gly-Gly-pCIPhe-Nle-OH-t. R. J. Miller és munkatársai [Vitamins and Hormones 36, 297—382, Academic Press (1978)] megemlíti az alábbi vegyületeket: H-Tyr-D-Ala-Gly-pCIPhe-D-Leu-OH, H-Tyr-D- Ala-Gly-pCIPhe-D-Leu-OMe és H-Tyr-D-Ala-Gly-;5ClPhe-D-Leu-NHE-t. Pless és munkatársai a 15. Európai Peptidszimpóziumon tartott előadásukban (1978. szeptember 4—9., Gdansk, Lengyelország) beszámoltak H-Tyr-D-Ala-Gly-pClPhe-Met(0)-OH öszszetételű vegyületükről. D. H. Coy és munkatársai [BBRC 83 (3), 977—983 (1978)] említik a H-Tyr-D-Ala-Gly-F5Phe-Met-NH2-t. A fenti közlemények egyike sem ír le az alábbi I általános képletű vegyületek körébe tartozó származékokat ; azt találtuk, hogy az enkefalin-analógok fájdalomcsillapító hatása tekintetében a halogénatomnak mind az anyagi minősége, mind pedig a helyzete döntő jelentőségű. A találmány tárgya eljárás az I általános képletű, ahol R2 jelentése metilcsoport vagy —CH(OH)—CH3 képletű csoport, R4 jelentése etiltio-metil-, p-metoxi-fenil- vagy fenilcsoport, R5 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és L és D az adott szénatom konfigurációját jelölik, enkefalin-származékok acetát-sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely I általános képletű, a peptidkémiában ismert módon védett enkefalin-származékr51 a védőcsoportot (vagy védőcsoportokat) lehasítjuk, és a terméket ecetsavval kezeljük. Az I általános képletű vegyületekben levő aszimmetria-centrumok konfigurációja e vegyületek igen lényeges \ onása. Kényelmi okokból az I általános képletű pentapeptidekben szereplő aminosav-egységeket a terminális aminocsoporttól kezdve megszámozzuk. Az egyes aminosav-egységek aszimmetria-centrumának konfigurációja az 1-es helyzettől a 4-es helyzet felé haladva : L, D és L. A 3-as helyzetben glicin szerepel, és ezért ezen egység esetében nem beszélhetünk aszimmetria-centrumról. Az 5-ös helyzetben (a C-terminális helyzetben) levő csoport aszimmetria-centrumának konfigurációja definíció-szerűen megegyezik a megfelelő természetes L-aminosav vagy a megfelelő természetes D-aminosav aszimmetria-centrumának konfigurációjával, vagy pedig természetesen lehet racém keverék is. Az I általános képletű pentapeptidekben szereplő egyes aminosav-egységek tekintetében a következő szempontok érvényesülnek : Aj 1-es hely Ez a peptid N-terminális része : L-tirozin. B/2-es hely Az I általános képletű peptidek 2-es helyén levő aminosav aszimmetria-centrumának D-konfigurációjúnak kell lennie, ezen a helyen D-alanin (Alá) (R2 jelentése metilcsoport) vagy D-treonin (Thr) (R2 jelentése —CH(OH)—CH3) szerepelhet. A peptid 2-es helyén előnyösen D-alanin van. C/3-as hely A peptid ezen helyén glicin (Gly) áll. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
