186108. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil S-adenozil-metionin sók előállítására
! ! 86 ; 08 2 A következő táblázatokaz elbomlott sók százalékarányát mutatják a megadott időpontokban: 2. táblázat S-adenozil-metionin • HC1 n maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 120 nap °C-on, 180 nap ha eltelt 240 nap 360 nap 1 0,2% 100% 100% 100% 100% 100% 2 0,5% 80% 100% 100% 100% 100% 3 0,8% 30% 60% 80% 100% 100% 4 1 % 5% 10% 14% 17% 20% 5 ' 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5% 6 2 % 5% 10% 14% 17% 20% A maradék SAM százalékarányát a feltüntetett időpontokban egy új, a későbbiekben ismertetett módszerrel határozzuk meg, amely a méréseknél maximális pontosságot biztosít, mivel lehetővé teszi, hogy a SAM-t teljesen elválasszuk az összes lehetséges bomlástermékektől. Ebből a szempontból azt találtuk, hogy a mostanáig használt módszerrel, amelyben egy Dowex 50 ioncserélő gyantával töltött analitikai oszlopot használnak [Schlenk és De Palma: J. Biol. Chem. 229 (1957)], a SAM elválasztása bizonyos bomlástermékektől, különösen metil-tio-adenozintól, nem tökéletes és ezért hibákat okozott a SAM stabilitásának kiértékelésében, amely jobbnak tűnt, mint amilyen valójában. A SAM meghatározásának jelenlegi módszere HPLC alkalmazásán alapul. Alkalmazott analitikai körülmények: Oszlop: Partisii 10 SCX, 2,5 x 250 mm Eluálószer: 0,1 mól/1 pH 4-es ammónium-forminát, 20% metanol tartalommal a HPLC-hez Áramlás: 1 ml/perc SAM-retenciós idő: kb. 400 másodperc A 2,3,4 és 5. táblázatok adataiból kitűnik, hogy 3. táblázat SAM • n H2SO4 n maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 120 nap °C-on, 180 nap ha eltelt 240 nap 360 nap 0,5 0,2% 100% 100% 100% 100% 100% 1 0,5% 80% 100% 100% 100% 100% 1,5 0,8% 30% 60% 80% 100% 100% 2 1 % 5% 10% 14% 17% 20% 3,5 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5% 3 2 % 5% 10% 14% 17% 20% SAM •1,5 H2SO4 ' n HC1 4. táblázat Bomlás 45 °C-on, ha eltelt n , , 60 nap nedvesség 120 180 240 360 nap nap nap nap 1 1 % 5% 10% 14% 17% 20% 2 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5% 3 2 % 5% 10% 14% 17% 20% 5. táblázat SAM 2HC1H;S04 n maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 120 nap "C-on, 180 nap ha eltelt 240 nap 360 nap 0.5 0,8% 30% 60% 80% 100% 100% 1 1 % 5% 10% 14% 17% 20% 1,5 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5% 2 2 % 5% 10% 14% 17% 20% a SAM-sók stabilitása akkor maximális, ha 5 savekvivalenst tartalmaznak. A 4 és 6 ekvivalensnyit tartalmazó sók stabilitása jó, míg az alacsonyabb savekvivalensszámú sóknak nincs gyakorlati hasznuk instabilitásuk miatt. Az is kitűnik, hogy a stabilitás azonos jellegű, függetlenül az alkalmazott savtól, feltéve, hogy a sav pK<2,5. 4—6 savekvivalenst tartalmazó sókat pk>2,5 savakkal nem sikerült előállítani. Stabilitási vizsgálatokat is végeztünk ugyanazzal a módszerrel a 3. és 4. példa szerint, liofilizációelősegítő anyag jelenlétében készített sókkal. E meghatározások eredménye a következő 6. és 7. táblázatban látható. A nedvességtartalom nagyfokú csökkenése, amikor a liofilizálást egy elősegítő anyag jelenlétében végezzük, jól kitűnik, a sók ebből eredő össz-stabilitásával együtt, amely ezáltal elérhető. 6. táblázat S-adenozil-metionin • 5 HC1 Maradék nedvesség Lebomlás 45 °C-on 360 nap után Segédanyag nélkül liofilizálva Mannittal liofilizálva 1,5% 5% (100 g SAM+ + 120 g mannit Aerosil-lal liofilizálva 0,1% (100 g SAM+ + 100 g Aerosil 0,2% 7. táblázat S-adenozil-metionin'2,5 H2 SO4 Maradék nedvesség Lebomlás 45 °C-on 360 nap után Segédanyag nélkül liofilizálva Mannittal liofilizálva 1,5% 5% (100 g SAM+ + 120 g mannit Aerosil-lal liofilizálva 0,1% — (100 g SAM+ + 100 g Aerosil 0,2% — A SAM • 5 HC1 és SAM • 2,5 H2SO4 sókat széleskörű farmakológiai screenelésnek vetettük alá, és minden esetben rendkívül érdekes aktivitást és toxicitási tulajdonságokat mutattak, amelyek függetlenek a SAM-hoz kötött aniontól. Megállapítottuk, hogy az új sók aktivitása lényegében a szervezetben felszabaduló SAM-ionnak azon képességé5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
