185920. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
1 185 920, 2 A találmány tárgya eljárás új polipeptidek, savaddíciós sóik és azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A találmány szerint az I általános képletű polipeptideket, valamint savaddíciós sóikat állítjuk elő. A képletben R jelentése 2-fenil-etilcsoport, vagy RCO- jelentése (D)Phe, (D)MePhe, (D)Phe(pF), Nie, Asn vagy Nle-Asn., B jelentése Phe vagy Phe/pF), E jelentése Thr, (D)Thr vagy (D)Ala, F jelentése (D)Ser-NH2, Ser-ol, Thr-ol, Leuol, Phe-ol vagy Asp-diol, Y, és Y2 jelentése azonosan hidrogénatom vagy együtt közvetlen kötést alkotnak, és az 1 - és 6-helyzetü maradékok egymástól függetlenül L- vagy D-konfigurációjúak. Előnyösek azok az I általános képletű polipeptidek, amelyek képletében RCO- jelentése (D)Phe vagy (D)MePhe, B jelentése P(ie, E jelentése Thr, F jelentése Thr-ol vagy Ser-ol. A találmány szerint előállított polipeptidek sóik alakjában is létezhetnek. A savaddíciós sók képzése történhet szerves savakkal, polimer és szervetlen savakkal. A savaddíciós sók magukban foglalják például a hidrokloridokat és acetátokat. A találmány szerint a polipeptidek a peptidkémiában ismert módszerekkel vagy azok nyilvánvaló kémiai ekvivalenseivel állíthatók elő; nevezetesen a következő eljárásokkal : a) az I általános képletnek megfelelő szekvenciája egyenes láncú vagy monociklusos, védett polipeptidről az összes jelenlévő védőcsoportot eltávolítjuk ; b) két peptidegységet, amelyek mindegyike legalább egy aminosav vagy aminoalkohol maradékot tartalmaz védett vagy szabad formában, az I általános képlet szekvencia-sorrendjében kondenzálunk, majd szükséges esetben az összes jelenlevő védőcsoportot eltávolítjuk ; c) az I általános képletnek megfelelő szekvenciájú, adott esetben védett polipeptidben az RCO- és/vagy F jelű csoportot más RCO- és/vagy F jelű csoporttá alakítjuk, és szükséges esetben az összes jelenlevő védőcsoportot eltávolítjuk; d) olyan I általános képletű monociklusos polipeptid előállítására, amelynek képletében Y! és Y2 együtt közvetlen kötést alkot, egy I általános képletű egyenes láncú polipeptidet, amelynek képletében Yj és Y2 hidrogénatom, oxidálunk, és kívánt esetben bármely eljárással kapott polipeptidet savaddíciós sójává alakítunk. A fenti eljárás például a mellékelt példákban leírt eljárásokkal analóg módon valósítható meg. Azok a kiindulási vegyületek, amelyek előállítását nem ismertetjük részletesen, ismertek vagy ismert eljárásokkal analóg módon állíthatók elő és tisztíthatok. A találmány szerinti polipeptidek, valamint gyógyászatiig elfogadható savaddíciós sóik értékes farmakológiai tulajdonságokkal rendelkeznek, amit az állatkísérletek is mutatnak. Különösen a GH-kiválasztását gátolják, amit a patkányokban a GH szérumszint depressziója jelez. Ezt a vizsgálatot nembutal narkózisban lévő hím patkányokkal végezzük. A vizsgálandó anyagot logaritmikusán változó dózisokban adagoljuk, dózisonként legalább négy patkánynak. A patkányokat a beadás után 15 perccel lefejezzük, a vért összegyűjtjük és a GH-szérumszintet radioimmun vizsgálattal meghatározzuk. Az említett polipeptidek és savaddíciós sóik olyan kóroktani rendellenesség kezelésére is alkalmasak, amelyek során túlzott GH-kiválasztás történik, vagy amelyeket túlzott GH-kiválasztás kísér, így például diabetes mellitus és angiopathia, valamint acromegalia kezelésére. Az említett egyenes láncú vagy monociklusos polipeptidek, sóik gátolják a gasztrikus és pancreas kiválasztást, amit a standard állatkísérletek mutatnak, amelyeket Kouturek és munkatársai által [Scand. J. Gastroent. 6, 423 (1971)] pancreas kiválasztás meghatározására leírt módszerével és a következő, gasztrikus kiválasztás mérésére alkalmas módszerrel végeztünk: 220-280 grammos hím patkányokat néhány napig külön-külön ketrecekben tartottunk a laboratóriumban (14 óra fény/nap), a kísérletet megelőzően 48 órás koplalással (de az állatok a vízhez szabadon hozzáférhettek). A kísérlet kezdetén a pylorust éter bódítás alatt elkötöttük és 100 pg/kg pentagastrint fecskendeztünk be szubkután a gasztrikus elválasztás fokozására. A vizsgálandó vegyületet egyidejűleg adtuk be intramuszkulárisan. 30 perccel később az állatot leöltük, a gyomornedv térfogatát mértük és a savkoncentrációt meghatároztuk (thymol kékkel történő titrálással). A savtermelést számítottuk és a százalékos gátlást a kezeletlen kontrollokhoz viszonyítva értékeltük. 1. példa szerinti vegyületnél ID50 0,09 pg/kg i.v. és 0,084 pg/kg i.m. Az említett polipeptidek és savaddíciós sóik alkalmasnak mutatkoznak továbbá gasztrointestinalis rendellenességek, például gyomorfekély, gyomor- és bélvérzés és akut pancreatitis kezelésére. A fenti alkalmazásra a polipeptid napi dózisa kb. 0,002, például 0,07 mg-tól kb. 20 mg-ig változik, amely részletekben napi 2-4 alkalommal egységdózisban vagy állandóan csökkenő formában adagolható. A megfelelő egységdózisok kb. 0,0005, például 0,02 mg és kb. 10 mg találmány szerinti polipeptidet vagy a gyógyászati szempontból elfogadható sójának ekvivalens mennyiségét tartalmazzák szilárd vagy folyékony halmazállapotú gyógyszerészeti hígítóval vagy hordozóval együtt. A fentiekkel összhangban jelen találmány vonatkozik továbbá egy találmány szerinti polipeptidet, azaz valamely I általános képletű polipeptidet vagy gyógyászati szempontból elfogadható savaddíciós sóját tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására is. A következő példákban a hőmérsékleti értékeket Celsius-fokban adjuk meg és az [a]“ értékek nem korrigáltak. A vegyületek és csoportok jelölésére a következő rövidítéseket alkalmazzuk: AcOH ecetsav 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
