185920. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
1 185 920 2 Asp-diol az aszparagin-diol maradék HO—CH2—CH,— ^-NH— —CH 'X'HjOH Boc terc-butoxi-karbonil-csoport BTFA bór-trisz(trifluor-acetát) DCCI diciklohexil-karbodiimid DMF N,N-dimetil-formamjd HOBT N-hidroxi-benzotriazol Hy —nhnh2 Thr-ol treoninol maradék NH— (CHjCH(OH)—CH CH2OH Ser-ol szerinol maradék (—NH—CH(CH2OH)2) Leu-ol leucinol maradék CH3—CH(CH3)— ^NH— — CH2CH "-ch2oh MBzI p-metoxi-benzil-csoport Me metilcsoport MeOH metanol MePhe-(N-metil)-Phe-NEt3 trietil-amin ONP 4-nitro-fenoxi-csoport Phe(pF)-p-F-Phe-Phe-ol fenil-alaninol maradék •NH TFA trifluorecetsav Z benziloxi-karbonil-csoport THF tetrahidrofurán IA) példa H-( D ) Phe-Cys-Phe-( D ) Trp-Lys-Thr-Cys-Throl-acetát 0,70 g Boc-(D)Phe-Cys(M Bzl)-Phe-(D)T rp-Lys(Boc)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-olt és 6,0 ml tioanizolt 9 ml trifluor-ecetsavban oldunk 0 °C-on. Az oldatot -10°-ra hűtjük és 12 ml kb. 2 mólos bór(trisz-trifluor-acetát)-ot adunk hozzá trifluor-ecetsavban oldva, keverés közben.A keverést másfél óra hosszat folytatjuk - 5 és - 10° közötti hőmérsékleten és 50 ml hideg abszolút metanolt (-70°) adunk az elegyhez, majd további 5 perc eltelte után 1 liter abszolút étert és 5 ml kb. 5 n éteres hidrogénklorid oldatot. A kivált terméket szűrjük, éterrel gyorsan mossuk és a maradékot azonnal 2,5 liter dioxán és víz 7:3 arányú elegyében oldjuk. Az oldat pH-ját híg ammóniaoldattal 7-7,5-re állítjuk és nyitott edényben keverjük szobahőmérsékleten, amíg -SH csoportok jelenléte már nem mutatható ki (például negatív Ellmann-próba). A pH-t sósavval 3-4-re állítjuk és a kapott oldatot vákuumban bepároljuk, és a terméket liofilizáljuk. A liofilizátumot kis mennyiségű 10%-os ecetsavban oldjuk, és gél-kromatográfiásan (Bio-Rad P4) 10%-os ecetsavval tisztítjuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk, igy a cím szerinti vegyületet kapjuk: [«][“ = -42° (c = 0,5, 95%-os ecetsavban). . A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: a) Z-Lys(Boc)-Thr-OMe 56 g Z-Lys(Boc)-OH-diciklohexil-aminsót 1200 ml tetrahidrofuránban oldunk, -20°-ra előhűtjük és keverés közben 13,5 ml klór-hangyasav-izo-butil -észtert adunk hozzá. A keverést további 20 percig folytatjuk — 15°-on és 21 g H-Thr-OMe-hidroklorid 600 ml tetrahidrofuránnal készült hideg (-21°) oldatát adjuk az elegyhez, majd 17 ml trietil-amint csepegtetünk hozzá -15°-on. A reakcióelegyet 18 óra hosszat keverjük 0°-on és a terméket vákuumban bepároljuk, majd éter és etil-acetát 1:1 arányú elegyével hígítjuk és a kivált diciklohexil-aminsót kiszűrjük. A szürletet vízzel, 2 n citromsavval, 10%os kálium-hidrogén-karbonát oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és szárazra pároljuk, a cím szerinti vegyületet kapjuk gyanta formájában; [a]“ = - 14° (c = 1, N,N-dimetil-formamidban). b) Z-Phe-(D)Trp-OH 9,0 g Z-Phe-OH-t 150 ml acetonitrilben oldunk és az oldatot — 18°-ra hűtjük, 3,4 ml N-metilmorfolint, majd 4,1 ml klór-hangyasav-izobutilésztert adunk hozzá. Az oldatot 15 percig keverjük - 15°-on és 6,2 g H-(D)-Trp-OH 30 ml n nátriumhidroxid és 100 ml acetonitril elegyével készült hideg oldatát adjuk hozzá és a keverést további 18 óra hosszat folytatjuk — 5 és 0° közötti hőmérsékleten. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, vízzel hígítjuk, és háromszor, kismennyiségü éterrel extraháljuk. A vizes fázis pH-ját 4 n kénsavval kb. 2-re állítjuk, és a csapadékot éter és ecetsav elegyével extraháljuk. Szerves fázist vízzel mossuk és vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, vákuumban bepároljuk. A maradékot éter és petroléter elegyével kristályosítjuk és a cím szerinti vegyületet kapjuk; olvadáspontja 113°; [a]^0 = - 5° (c = 0,9, N,N- di metil-formamidban). c) Z-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe 6,0 g Z-Lys(Boc)-Thr-OMe-t 150 ml metanolban palládiumszén jelenlétében hidrogénezünk. A terméket szűrjük, metanollal mossuk és a szürletet vákuumban bepároljuk. A maradékot 4,8 g Z-Phe(D)Trp-OH és 2,0 g HOBT hozzáadásával 50 ml N,N-dimetil-formamidban oldjuk. Az oldatot - 15°-ra hűtjük és 2,1 g diciklohexil-karbamid 15 írd N,N-dimetil-formamiddal készült oldatát adjuk hozzá keverés közben. Az oldatot további két napig keverjük 0°-on, vákuumban bepároljuk, ecetsav és éter 1:1 arányú elegyével hígítjuk és a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. A szürletet 2 n citromsavval, 10%-os kálium-hidrogén-karbonát 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
