185784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás növények tartósítására takarmányozás céljaira
1 185 784 2 Vizsgált szubsztrátum Vizsgált cetluláz PH értéke Az aktivitás NE/g A táblázat kiértékelése alapján meghatározhatjuk a cellulolitikus komplex aktivitását, hogy a találmány szerinti eljárást alkalmazhassuk a silózásnál : azt találjuk, hogy a találmány szerinti eljárásnál ezek a silózott növényhez adandó celluláz vagy cellulolitikus komplex Ct aktivitása 50-0,05 NE- nek, a Cx aktivitása pedig 500-0,05 NE-nek felel meg 100 g növényre; ezeket az aktivitásokat pH 4,8-nál és 50 °C-on 20 perces hidrolízis után határozzuk meg. A választott celluláznak nagy aktivitásúnak kell lennie, még a silóban való hosszas tárolás után is. Kísérletekkel kimutatjuk, hogy a silózáshoz hasonló körülmények között a cellulolitikus komplexnek még 10 nap múlva is meg kell őriznie kezdeti aktivitásának legalább 30%-át. Tartósítás ideje napokban 0 5 10 15 20 pH 4.8 100% 97% 61% 26% 3% pH 5,8 100% 85% 58% 27% 0% A növény szerkezetének enzimes lebontási sebessége a glükóz eliminálásától-függ; az enzimes egyensúlynak ezt az eltolását úgy éljük el, hogy nagy erjesztőképességű baktériumokat alkalmazunk, a közeg savassá válása nagyon gyorsan bekövetkezik. Amikor a növény tömege stabilizálódott, a baktériumok szaporodása és így a tej sav-termelés leáll, ellentétben a celluláz cellulolitikus aktivitásával, ami 10 napnál tovább is tart. Ez az aktivitás, vagyis a glükóz termelése és felhalmozása a silózás folyamán növeli a silózott növény tápértékét. A találmány szerinti eljárásban használt enzimes készítmény tehát egy cellulózt vagy egy cellulolitikus komplexet tartalmaz, ami a fenti jellemzőkkel rendelkezik, és ehhez társulhatnak a 2 390 908 számú francia szabadalmi leírásban ismertetett enzimek, tehát egy gomba eredetű exoamiláz, egy amiloglükozidáz és egy hemicellulolitikus komplex, valamint a Gram-pozitív Lactobacillus E és F enzime, valamint az Enterococcus B és C eredetű amiláz. Ezeknek a készítményekben lévő enzimeknek kiegészítő hatásuk is van a glucidokra gyakorolt aktivitással, a legösszetettebbektől a legegyszerűbbekig, pH 7-2 intervallumban. Mindegyik enzim aktivitásának a maximuma a pH csökkenésével függ össze, ami a silóban nem csökken pH 3-5 alá, és a 10-30 °C közötti hőmérséklettartományban lép fel, ami a siló feltételeivel megegyezik. A találmány szerinti eljárásban használt bakteriális készítményt az jellemzi, hogy új baktériumtörzset tartalmaz, amelyek a növény silózásánál használhatók; ezeket a törzseket a már ismert baktériumtörzsekkel és enzimekkel együtt alkalmazzuk. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott készítmények sokkal jobb silózási eredményekhez vezetnek. A találmány szerinti új baktériumtörzs Gramnegatív baktérium; az Enterobacteriaceae családba, az Erwinia vagy Pectobacterium nemzetségbe, a Herbicola csoportba tartozik, nevük : Enterobacter agglomerans (az osztályozást lásd Bergey’ s Manual of Bacteriology, 8. kiadás). Az alábbi táblázat ezen baktérium jellemzőit tartalmazza: /. táblázat Enterobacter agglomerans Gram — szorbitmalonát-hasznosítás + arabinózglükóz + maltózfenil-alanin dezamináztrehalóz + ONGP + xilózindolkeményítő + HjS-oxidáz — LDC-zselatin + ODC-amigdalinureázmelibiózszacharóz-Voges-Proskauer + arginin dehidroláz szalicin ribitol inozitramnóz A növények silózásakor használt új baktériumtörzsek egyedül, vagy más baktériumtörzsekkel, és enzimekkel együtt ismert módszerekkel alkalmazhatók. A baktériumokat gabonalisztet tartalmazó táptalajon lehet tenyészteni. A silóba bejuttatandó készítményt a szükséges baktériumok elegyét tartalmazó oldékony vagy nem oldékony hordozóval, a találmány szerinti enzimeleggyel együtt használjuk. A találmány szerinti eljárás előnyös módja szerint az enzimeket és baktériumokat gabonahordozóra (búzára, árpára, kicsírázott árpára), előnyösen finomra őrölt lisztre viszik fel. A találmány szerinti másik előnyös eljárás szerint a baktériumokat és az enzimeket például előzse latinált keményítő, maltohexóz-típusú hordozóra visszük fel, ami könnyen oldódik hideg vízben. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
