185603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rosszindulatú daganatos sejtek kimutatására
1 185 6Û3 2 A 3-szulfo-alanin, hidroxiprolin, norleucin, ammónia, izodezmozin, dezmozin, hidroxilizin, lizinonorleucin és gamma-vajsav nincsenek jelen kimutatható mennyiségben. A 3. példában szereplő 12 db 250 ml-es reakciókamrában összesen 1 mg malignint sikerült előállítani. A malignin és az astrocityn szerkezetét kimerítő számítógépes vizsgálattal igazoltuk, a fenti vegyületek összetételét lényegében az összes ismert proteinnel összevetettük. A malignin és astrocytin aminosav összetételét, valamint kétféle módon az egyes aminosav komponensek abszolút és relatív mennyiségét la) egyes aminosav maradékok teljes száma egy molekulában és b) az egyes aminosavak molekulasúly hányada az összmolekulasúiyban] számítógépes analízisnek vetettük alá a világ legnagyobb protein-szerkezet gyűjteménye szerint (National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C.). Több százezer proteinnel vagy protein fragmenssel összevetve a mátrix analízises összevetéssel nem találtunk az astrocytinnel azonos szerkezetet vagy ezekhez közelálló szerkezetet. A szerkezetileg közelálló proteineket a III. táblázat mutatja az egyes aminosav összetételek és molekulasúlyok feltüntetésével az összehasonlítás végett. A számítógép úgy van beprogramozva, hogy a több százezer lehetőség közül a legkisebb szerkezeti hasonlósági fokot is kimutatja. így például sokkal nagyobb vagy kisebb molekulasúlyú proteinek, vagy 85-nél kevesebb vagy 95-nél több maradékot tartalmazó proteinek, vagy 12-nél kevesebb vagy 15-nél több glutaminsav maradékot tartalmazó vagy 6-nál kevesebb vagy 11-nél több aszparaginsav maradékot tartalmazó proteinek nem jönnek szóba és így tovább a húsz aminosav mindegyikére. 5 Ez az „ujjlenyomat” így 22 egyedi változónak felelhet meg. Néhány anyag egy, négy vagy öt változónak felelhet meg, de egyik sem felelhet meg mind a 22-nek. Valójában egyik sem felelhet meg 14 változónál többnek, igy a különbség 8 változó marad. 10 A legközelebb esik a citokróm b5 (humán). A III. táblázatból kitűnik, hogy az alanin, arginin, aszparagin, aszparaginsav, cisztein, glutamin, hísztidin, metionin, tirozin és triptofán maradék számok mind lényegesen különböznek az astrocytintől és a malignintól. Mivel 15 a citokróm bs 7 hisztidint tartalmaz és az astrocytin és malignin 2 hisztidint tartalmaz, kémiai szerkezetük nem lehet azonos. Az astrocytin és malignin összetételében az legrendkívülibb, hogy a glutaminsav koncentrációja milyen nagy? 20 89-ből 5 vagy 6 maradék volna várható. További legközelebb eső vegyületek a leucaene glauca növény és a lucerna ferrodoxinjai, de ezek is lényegesen különböznek négy, illetve hat amínosavban és lényegesen különböznek amínosavban és abban, hogy 96 illetve 97 25 maradékot tartalmaznak. A következő legközelebb eső vegyület az E. coli 26-ból levezethető acilhordozó proteinje, de ez is lényegesen, 11 amínosavban különbözik a malignintól és astrocytintől és csak 77 maradékot tartalmaz. 30 A III. táblázatban néhány más agy protein (neuro-III. táblázat Az astrocytin és malignin szerkezetének összevetése a legközelebbi szerkezetekkel, számítógépes elemzéssel Astrocytin Malignin Citokróm, b5 Ferredoxín Ferredoxin Luc. Gl. lucerna E. Coli hordozó, Ac ;i Neurofizin szarvasmarha Neuro fizin sertés Gonadotropin felszabadító hormon Aszpartic add 9 9 9 10 8 7 2 3 0 Treonin 5 5 6 4 6 6 2 2 0 Szerin 6 5 5 7 8 3 6 7 1 Glutaminsav 13 13 14 13 13 14 9 9 0 Prolin 4 4 3 5 3 1 8 7 1 Giicin 6 6 6 7 7 4 16 14 2 Alanin 9 7 4 ó 9 7 6 7 0 Valin 4 6 4 6 9 7 4 2 0 1/2 Cisztin 2 1 0 5 5 0 14 14 0 Metionin 1 2 1 0 0 1 1 1 0 lzoleucin 2 4 4 4 4 7 2 2 . 0 Leucin 8 8 7 10 6 5 6 7 1 Tirozin 2 3 3 3 4 1 1 1 1 Fenil alanin 3 3 3 3 2 2 3 3 0 Lizin 8 6 7 5 5 4 2 2 0 Hisztidin 2 2 7 1 2 1 0 0 1 Arginin 4 5 3 2 1 1 7 5 1 Aszparagin 0 0 0 0 1 2 3 2 0 Triptofán 0 0 1 1 1 0 0 0 1 Glutamin 0 0 0 4 3 4 5 4 0 összes maradék: 88 89 87 96 97 77 97 92 10 Molekulasúly: 8000 10 000 10 035 10 493 8509 10
