185603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rosszindulatú daganatos sejtek kimutatására
1 185 603 2 ne öntsük le és a felülúszó optikai sűrűségét 280 mp-nél olvassuk le. Az optikai sűrűség értékét elosztjuk 1,46-tal és akkor eredményként az S-TAG mennyiségét kapjuk mikrogrammban törve a szérum protein ml-ével. A párhuzamos meghatározásnak nem szabad 5%-kaI többel 5 eltérni egymástól. Bármilyen más protein-tartalom meghatározási módszert, így például Folin-Lowry-féle módszert is alkalmazhatunk, de standardokat kell alkalmazni, hogy meghatározzuk a kontroli-tartományt és az S-TAG mínusz F-TAG koncentráció tumornak megfelelő 10 értékhatárait. Az F-TAG meghatározása a következő módon történik: Pár napnál tovább tárolt fagyasztott szérumot nem használunk. A szérumot óvatosan, frissen kapott vérből vagy más testfolyadékból az irodalomból ismert módon 15 állítjuk elő. A fent leírt módszert eredményesen alkalmazhatjuk. A fent leírt módon kapott szérum-mintákat a célreagenssel együtt 4 °C-on 10 perccel rövidebb ideig hagyjuk állni, mint az S-TAG meghatározásnál (például ha 20 az S-TAG meghatározás két óráig tartott, akkor 1 óra 50 percig hagyjuk állni). Ez a módszer kiegyenlíti az S-TAG és F-TAG meghatározásánál bekövetkezett hőmérsékleti különbséget. 0,2 ml hőegyensúlyozott szérumot adunk az egyes 0,25 ml-es, 100-200 mikrogramm recognint tartalmazó ,,cél’’-reagens szuszpenzió aliquotokhoz és párhuzamos meghatározást végzünk. A szuszpenziót ezután 4 °C-on körülbelül 10 percig keverjük, oly módon, hogy a pelletképződést megakadályozzuk. Például egy gyorsan rázott gumisapkát használhatunk 1—2 másodpercig, majd a csöveket enyhén megdöntjük, majd mintegy 10 percig egy Thomas-féle rázóberendezésben rázzuk. A ,,cél”reagenst és a hozzá kapcsolódó proteint elválasztjuk a szérumtól. Az egyik bevált további módszer a következő. A csöveket 2000 percenkénti fordulatszámmal 20 percig 4 °C-on centrifugáljuk, a felülúszót dekantáljuk és a centrifugálás közben keletkezett pelletet háromszor mossuk szobahőmérsékleten 0,2-0,3 ml 0,15 mólos sóoldattal történő újra felkeveréssel és rázással, majd centrifugáljuk és a felülúszókat eltávolítjuk. A ,,cél”-reagenshez kötve maradt proteint lehasítjuk róla és mennyiségileg meghatározzuk. Az S-TAG mennyiségi meghatározásához használt módszert alkalmazzuk. V. táblázat Normális* Elsődleges rosszindulatú agytumor Rosszindulatú más tumorok, áttétel az agyban Rosszindulatú más tumorok, nincs áttétel az agyban Bizonytalan agyi diagnózis Szérum Szérum Szérum Szérum Szérum Szérum Szérum Szérum TAG TAG TAG TAG TAG TAG TAG TAG Mg/ml Mg/ml, Mg/ml, Mg/ml, Mg/ml, Mg/ ml, Mg/ml, Mg/ml, 124 19 54 65 459 270 364 165® S13 55 27 113 397 257 ! 315 1449 105 51 41 130 236 188 44214 13* 130 82 21 79 137 205 28814 20910 127 44 27 61 298 1577 7510 38 127 21 12.3 397 18411 100 31 0 14 241 27n 125 0 14 20 241 11012 30 125 62 41 217 19215 2501 118 38 34 147 39 896 93 93 127 3631 99 21 48 185 4 132 0 20 253 31 2703 120 82 253 42 7 16 20 565 34 58 20 55 277 76 24 113 0 137 48 62 72 7813 85 89 138 89 650 160 *Ide tartoznak a nem-tumoros orvosi és sebészeti rendellenességek. 1 - nagyon beteg, nem diagnosztizált; 2 — extra agyközötti tömeg, nem diagnosztizált; 3 - jelzett gliozis; 4 - rosszindulatú melanoma; 5 - oszteoszarkoma; 6 - agyciszta folyadék; 7 - vastagbél adenocarcinoma; 8 - gyomorkimetszés; 9 - fejfájás; 10 - emphysema; 11 - polymyalgia; 12 — vastagbélrák; 13 - görcs; 14 - prosztatarák, áttételek a csontra; 15 - klinikailag normális volt 18 hónappal ezelőtt, amikor ezt az abnormális TAG-ot kaptuk; most komoly fejfájás jelentkezik, ízlelés és szaglás elvesztése. 14
