185427. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormon-antagonisták előállítására
1 185 427 2 8. példa D - Fenilalanil - D - p - bróm • fenilalanil -D - triptofil - L - szeril - L - tirozil - D - fenilalanil -L - leucil - L- argin il-L -prolilglicinamid, (D-Phe1, D-p-Br-Phe2, D Trp3, D-Phe6 j LH RH előállítása A 3. példában leírt pepiid gyantáról (1,42 g) a védőcsoportok és a hordozó gyanta eltávolítása a kötőcsoportokkal együtt, a 6. példában leírt feltételek mellett történik. A nyers peptidet a 6. példa szerinti oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk és a tiszta, liofilizált, pelyhes por alakjában megkapott pepiid súlya 203 mg. A termék, azaz a cím szerinti vegyidet vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat során homogénnek bizonyult. Ezt a vizsgálatot szilikagélen végeztük négy oldószer rendszer felhasználásával a 6. példában leírt módon. A következő Rf értékeket kaptuk: (A) 0,48, (B), 0,54; (C), 0,79; (D), 0,59. Az aminosav analízis eredménye : Ser, 0,79; Pro, 0,94; Gly, 1,00; Leu, 1,02; Tyr, 0,94; Phe, 1,84; Trp, 0,93; Arg és p-Br-Phe, 1,84. 9. példa D - Fenilalanil - D - p - klór - fenilalanil - D - triptofil- L - szerű - L - tirozil - D - fenilalanil - L - leucil - L - argú i il-L -prolű-glicii t amid -(DPh e1, D-p-Cl-Phe2, D-Trp3, D-Phe6 )-LH-RH előállítása. A 4. példa szerint előállított peptíd gyantáról (0,76 g) a védő-csoportokat és a hordozó gyantát a 6. példában leírt feltételek mellett távolítjuk el a kötő csoporttal együtt. A nyers peptidet a 6. példában leírt oszlop kromatográfiával tisztítjuk, azzal a kivétellel, hogy most 5:1:1 arányú 1-butanol:ecetsav:víz elegyét használjuk eluáláshoz. A tiszta cím szerinti vegyületet pelyhes fehér por formájában kapjuk meg, liofilizálás után (94 mg). Ez a termék a vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat során homogénnek bizonyult. A vizsgálatot szilikagél lemezek felhasználásával végeztük a 6. példában leírt oldószer rendszer alkalmazásával. A következő Rf értékeket kaptuk. (A) 0,42; (B) 0,46; (C) 0,72; (D) 0,60. Az aminosav analízis eredménye: Ser 0,83;Pro, 0,94; Gly, 1,00; Leu, 1,01; Tyr, 0,93; Phe, 1,93; p-Cl-Phe, 0,95; Trp, 0,85; Arg, 0,98. 10. példa N - Szűkeiről - D - fenilalanil -D -p - klór - fenilalanil- D - triptofű - L - szerű - L - tirozil - D - fenilalanil - L- leucil-L-arginil-L-prolil-glicinamid, (Succ-D Phe1, D-p-Cl- Phe2 , D-Trp3, D-Phe6 J-LH-RH előállítása Az 5. példában leírt 0,75 g peptid-gyantáról a védőcsoportok (N-szukcinii csoportok kivételével) és a hordozógyanta eltávolítása a kötőcsoportokkal együtt, a 6. példában leírt feltéteiek mellett történik. A nyers peptid tisztítását a 6. példa szerinti kromatográfiás oszlop felhasználásával és az ott leírt feltételek mellett végezzük. A tisztított cím szerinti vegyületet liofilizálás után fehér, pelyhes por alakjában kaptuk meg (78 mg). A termék vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat alapján homogénnek bizonyult.. A vizsgálatot a 6. példában leírt oldószer rendszerrel végeztük. A következő Rf értékeket kaptuk: ■A) 0,52; (D) 0,71, 2-propanol: 1 mól ecetsav (2:1); 0,70; etil-acetát: piridin : ecetsav: víz (5:5:1: 3), 0,94. Az aminosav analízis eredménye: Ser, 0,86; Pro, 0,98; Gly, 1,00; Leu, 1,09; Tyr, 1,06; Phe, 1,98, p-alfa-Phe, 0,97; Trp, 0,94; Arg, 1,01. 11. példa N - A cetli -D -p - klór - fenilalanil - D - p - klór - fenilalanil - D - triptofil - L - szerű - (O - benzil) -L - tirozil- 0 - triptofil - L - leucil - L - arginil(NG - tozil) - L - prolilglicü-benzhidril-amin-gyanta előállítása A peptid-gyantát az 1. példában leírt sorrendben és feltételek mellett állítjuk elő azzal a különbséggel, hogy a t-Boc-D-fenilalanil helyett t-Boc-D-p-klórfenilalanint használunk, majd a dekapeptid-gyantát a 2. példában leírt feltételek mellett acilezzük. A kész, acetilezett száraz pepiid gyanta (azaz a cím szerinti vegyidet) súlya 1,58 g. 12. példa N - Acetű - D - triptofil - D -p - klór - fenilalanil - D- triptofil - L - szerű-(0-benzilj - L - tirozil - D - triptofil- L - leucil - L - arginil - (N(' - tozil) - L - prolii - glicilbenzh idril-amin -gyan ta előállítása A peptid gyantát ugyanolyan sorrendben és feltételek között állítjuk elő mint ahogy az 1. példában leírtuk, azzal a kivétellel, hogy t-Boc-D-triptofánt viszünk be az 1-es pozícióba a t-Boc-D-fenilalanin helyett. A kész, acilezett, szárított peptidgyanta (azaz a címbeli vegyület) súlya 1,62 g. 13. példa N - Acetű - D - fenilalanil - D -p ■ klór - fenilalanil- D - triptofil - L - szerű - (O - benzil) - L - tirozil - D- triptofil - L - leucil - L - arginil - (N° - tozil) -L - prolil- D-alanil-benzhidril-amin-gyanta előállítása A peptid-gyantát ugyanolyan sorrendben és feltételek mellett állítjuk elő, mint ahogy azt az 1. példában leírtuk, azzal a kivétellel, hogy i-Boc-D-alanint viszünk be a molekulába a t-Boc-glicin helyett, majd a kapott dekapeptid-gyantát a 2. példában leírt feltételek mellett acilczzük. A kész, acilezett, szárított peptid-gyantát (azaz a cím szerinti vegyületet) lemérve 1,61 g-ot kapunk. 14. példa N - Acetű - D - p - klór - fenilalanil - D -p - klór -fenilalanil - D - triptofil - L - szerű - L - tirozil - D - triptofil- L - leucil - L - arginil - L - prolii - glicin - amidfN - ac - D- p-Cl-Phe12..D-Trp3 6 )-LH-RH előállítása All. példában leírt gyantáról a 6. példában leírt feltételek mellett eltávolítjuk a védő-csoportokat (az N~ acetil típusúak kivételével) és a hordozógyantát a kötőcsoporttal együtt. A kivétel az, hogy most a szilikagél eluálásához 17:5:1:3 arányú etilacetát:piridin:ecetsav:viz elegyet használunk. A liofilizált peptid, azaz a cím szerinti vegyület fehér, pehelyszerű por, (118 mg) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
