185427. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormon-antagonisták előállítására
1 185 427 2 amely a szilikagélen négy oldószer rendszerben végzett vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat során homogénnek bizonyult. A következő Rf értékeket kaptuk: (A) 1- butanol:ecetsav:víz (4:1:5, felső fázis), 0,51; (B) 1- butanol:ecetsav:víz:etilacetát (1:1:1:1) 0,83; (C) etilacetát:piridin: ecetsav: víz (5:5:1:3) 0,95; és izoptopanol : 2 mólos ecetsav (2:1) 0,72. Az aminosav analízis eredménye: Ser, 0,86; Pro, 1,00; Gly 1,00; Leu, 1,02; Tyr, 0,93; p-Cl-Phe, 2,02; Trp, 1,40; Arg, 0,99. 15. példa N - Acetil - D - triptofil - D -p - klór - fenilalanil - D- triplofü - L - szeril - L - tirozil - D - triptofil - L - leucil- L - arginil - L -prolii -glicinamidfN -Ac -D - Trp1,3,6,D- p-Cl-Phe2 )-LH-RH előállítása A 12. példa szerint előállított gyantáról eltávolítjuk a védőcsoportokat és a hordozógyantát a kötőcsoporttal együtt. A szabad pepiidet a 14. példában leírt feltételek mellett tisztítjuk. A liofilizált peptid, azaz a cím szerinti vegyidet fehér, pehelyszerű por (88 mg), amely szilikagélen négy oldószer rendszerben végzett vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat alapján homogénnek bizonyult. Az alábbi Rf értékeket kaptuk: (A) 1-butanol :ecetsav:víz (4:1:5) felső fázis), 0,52; (B) 1-butanol : ecetsav :víz-etilacetát (1:1:1:1) 0,78; (C) etilacetát:piridin: :ecetsav:víz (20: 5:1:3), 0,22; (D) izopropanol: 2 mólos ecetsav (2 : 1) 0,70. Az aminosav analízis eredménye: Ser, 0,81;Pro, 0,97; Gly, 1,02; Leu, 1,03; Tyr, 1,03; p-Cl-Phe, 0,97; Trp, 3,06; Arg, 0,99. 16. példa N -Acetil - D -fenilalanil -D - p - klór - fenilalanil - D- triptofii - L - szeril - L - tirozil - D - triptofil - L - leucil- L - arginil - L - prolii - D - alaninamid,(N -Ac-D- Phe1 D-p-Cl-Phe2 P-Trp3-6 JD-Ala10 j-LH-RH előállítása A 13. példa szerint előállított gyantáról eltávolítjuk a védőcsoportokat és a hordozógyantát a kötőcsoporttal együtt. A szabad pepiidet a 14. példában leírt feltételek mellett tisztítjuk. A liofilizált peptid fehér, pelyhes por, (159 mg), amely a 15. példában leírt négy oldószeres rendszerben homogénnek bizonyult. (A) 0,56; (B), 0,83; (C), 0,24, (D), 0,68. Az aminosav analízis eredménye : Ser, 0,88; Pro, 1,00; Alá, 1,06; Leu, 1,00; Tyr, 0,97; Phe, 0,95; p-Cl-Phe, 0,96; Trp, 2,08; Arg, 0,93. 17. példa D -Fenilalanil -D -p - fluor - fenilalanil - D - triptofll- L - szeril - (O - benzil) - L - tirozil - D - fenilalanil - L- leucil - L ■ arginil - (N^ - tozil) - L - prolii -glicil - benzhidril-amin-gyan ta előállítása. A peptid gyantát az 1. példában leírt sorrendben és feltételek mellett állítjuk össze azzal a kivétellel, hogy t-Roc-D-fluorfenilalanint viszünk be a t-Boc-D-klórfenilalanin helyett és hogy t-Boc-feniialanint viszünk be a lánc 6-os helyzetébe a t-Boc-D-triptofán helyett. A kész, száraz pcptid-gyanta, azaz a cím szerinti vegyület súlya L41 g. 18. példa D - Fenilalanil -D - p - fluor - fenilalanil - D - triptofil- L - szeril - L - tirozil - D - fenilalanil - L - leucil - L - arginil - L - prolii - glicinamid.fD - Phe' X) - p - F - Phe2 ,DTrf 3 ,D-Phe6 )-LH-RH előállítása A 17. példa szerint előállított peptid-gyanta 1,41 gjáról eltávolítjuk a védőcsoportokat és a hordozógyantát a kötőcsoporttal együtt a 6. példában leírt feltételek mellett. A nyers pepiidet a 6. példában leírt oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, majd a tiszta, liofilizált pelyhes fehér port lemérve 153 mg-ot kapunk. A termék, azaz a cím szerinti vegyület, szilikagélen végzett vékonyréteg kromatográfia szerint homogénnek bizonyult. A kromatográfiánál a 15. példában leírt három oldószer rendszert használtuk, melynek Rf értékei a következők: (A) 0,48; (B) 0,81;(C) 0,53. Az aminosav analízis eredménye: Ser, 0,88; Pro, 1,03; Gly 1,10; Leu, 1,00; Tyr, 0,98; Phe, 1,95; p-F-Phe, 0,98, Trp, 0,93; Arg, 1,02. A megfelelő Rf értékeket a következő összetételű eluálószerek alkalmazásával határoztuk meg: (A) l-butanol:ecetsav:víz:etil-acetát (1:1:1:1) (B) etil-acetát:piridin:ecetsav:víz (5:5:1: 3) (C) izopropanol: 1 mól ecetsav (2:1) (D) l-butanol:ecetsav:víz(4:l:l) aj N - acetil - D - p - klór - fenilalanil - D - p - klórfenilalanil - D - triptofil - L - szerii - L - tirozil - D - fenilalanil - L - leucil - L - arginil - L - prolii - D - alaninamid, (N-ac-D-p-Cl-Phe1,2, D-Tip3, D-Phe6, D-Ala10) LH-RH Rf é'tékek: (A) 0,66; (B) 0,94; (C) 0,71 ; (D) 0,53 b) N - acetil - D - triptofil - D - p - klór - fenilalanil- D - triptofil - L - szeril - L - tirozil - D - fenilalanil - L- leucil-L-arginil-prolil-D-alaninamid, (N-Ac-D-Trp1, D-p- Cl-Plie2, D-Trp3, D-Phe6, D-Ala10) LH-RH Rf é-tékek: (A) 0,76; (B) 0,96; (C) 0,70; (D) 0,54 c) N - acetil - D - p - fluor - fenilalanil - D - p - klórfenihüanil -D-triptofil - L - szeril-L - tirozil -D - triptofil- L - leucil - L - arginil - L - prolii - D - alaninamid, (N - Ac-D-p-F-Phe1, D-p-Cl-Phe2, D-Ala10)LH-RH Rf értékek: (A) C ,77; (B) 0,95; (C) 0,73; (D) 0,57 d) N - acetil - alanil - D - p - klór - fenilalanil - D - triptofil - L - szeril - L - tirozil - D - triptofil - L - leucil- L-argmil-L-prolil-D-alanamid, (N-Ac-Ala1, D-p-Cl-Phe2, D-Trp3,6, D-Ala10)LH-RH Rf ér'ékek: (A) 0,64; (B) 0,89; (C) 0,67; (D) 0,47 e) N - acetil - D - alanil - D - p - klór - fenilalanil - D- triptcfil - L - szeril - L - tirozil - D - triptofil - L - leucil- L-arginil-L-prolil-D-alaninamid, (N-Ac-D-Ala1, D-p-Cl- Phe2 , D-Trp3,6, D-Ala10) LH-RH 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
