185427. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormon-antagonisták előállítására
2. példa 1 185 427 2 N - Acetil - D - feniialanil - D - p - klór - feniialanil- D - triptofil - L - szeril(0 - bem.il) - L - tirozil - D - trip-tofü - L - leucil - L - arginil - (ffí - tozil) - L - prolilglicil-benzidril-amin-gyanta előállítása Az 1. példa szerint előállított dekapeptid gyantának egy részét (0,76 g-ot) 30 percig kezelünk olyan 30 mlnyi oldattal, amely 100 ml metüén-kloridban 5 g imidazolt és 3,54 ml ecetsavanhidridet tartalmaz. Azacetilezett pepiid gyantát ezután háromszor metilén-kloriddal, majd háromszor metanollal mossuk és vákuumban megszárítjuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk meg. 3. példa D - Feniialanil -D - p - bróm - fenil - alanil - D - triptofil - L - szeril - (O - benzil) - L - tirozil - D - feniialanil - L-leucil - L - arginil - (bfi - tozil) - L - prolii - glicil - benzhidril-amin-gyanta előállítása A peptid gyantát az 1. példában leírt feltételek mellett és hasonló elrendezésben készítjük el azzal a kivétellel, hogy a t-Boc-D-klórfenil-alanin helyett t-Boc-D-pbróm-fenilalanint használunk és hogy a t-Boc-D-triptofán helyett t-Boc-fenilalanint használunk a lánc 6-os helyzetében. A cím szerinti vegyületnek megfelelő befejezett száraz peptid-gyanta súlya 1,42 g. 4. példa D - Feniialanil D - p - klór - feniialanil - D - triptofil- L - szeril - (O - benzil) - L - triptofil - D - feniialanil - L-leucil - L - arginil - (N0 - tozil) - L - prolii - glicil - benzhidril-amin-gyanta előállítása A pepiidet az 1. példában leírt feltételek mellett és hasonló sorrendben készítjük el azzal a kivétellel, hogy a lánc 6-os helyzetében levő t-Boc-D-triptofán helyett t-Boc-fenilalanint használunk. A cím szerinti vegyületnek megfelelő, befejezett száraz peptid-gyanta súlya 1,41 g. 5. példa N - Szukcinil -D - feniialanil - D - p - klór - feniialanil- D - triptofil - L - szeril - (O - benzil) - L - tirozil - D - fenilalanil - L - leucil - L - arginil - (N0 - tozil) - L - prolilglicil-benzhidril-amin-,gyanta előállítása A 4. példa szerint előállított dekapeptid gyantának 0,76 g-ját 30 ml olyan oldattal reagáltatjuk, amely metilén-kloridban imidazolt és szukcinil-kloridot tartalmaz. A reakciót 30 percig végezzük. Acetilezett peptid gyantát ezután metilén-kloriddal és metanollal mossuk, majd vákuumban megszárítva a cím szerinti vegyületet kapjuk meg. 6. példa D - Feniialanil - D -p - klór -feniialanil - D - triptofil- L - sí eril - L - tirozil - D - triptofil - L - leucil - L - arginil- L -prolil-glicinamidfD-Phe1, D-p-Cl-Phe2, D-Trp^5 6 )-LHRB acélát sójának előállítása Az 1. példában leírt gyantáról a dekapeptid lehasítása és a védő-csoportok eltávolítása úgy történik, hogy 0,7 g anyagot 20 ml hidrogén-fluoriddal, 5 ml anizollal és 50 mg 1,4-dithiothreitollal reagáltatunk 1 óráig 0 °C-on. A hidrogén-fluoridot ezután nitrogén atmoszféra alatt eltávolítjuk és a pepiidet dietil-éter hozzáadásával kicsapjuk. A nyers pepiidet 50 %-os ecetsawal extraháljuk. Finom eloszlású, kémiailag módosított térhálós szerkezetű dextránt, kereskedelmi néven „Sephadex G-50”-et tartalmazó 2,5 X 95 cm-es oszlopon leszűrjük és 50 %-os ecetsawal eluáljuk. Az UV abszorpciónál 280 nm-es fő csúcsot tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és szárazra pároljuk. A kapott olajat egy szilikagélt tartalmazó 1,5 X 145 cm-es oszlopra öntjük fel, majd 5 rész 1-butanol és 1 rész ecetsav és 1 rész víz elegyével eluáljuk. A fő csúcsot tartalmazó terméket összegyűjtjük, olajjá pároljuk be és hígított ecetsavból liofilizáljuk. 86 mg cím szerinti terméket kapunk fehér, pelyhes por alakjában. A termék vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat során homogénnek bizonyult. A vizsgálatot 20—30 meg anyaggal 4 különböző oldószer rendszerrel szilikagélen végeztük. A foltokat CF-keményítő reagenssel és Ehrlich-féle reagenssel hívtuk elő. Az alábbi Rf értékeket kaptuk: (A) 1-butanol:ecetsav:víz (4:1:5, felső fázis), 0,51; (B) etilacetát : piridin : ecetsav:víz (20:5:13) 0,16; (C) 1- butanoi:ecetsav:víz:etil-acetát (1:1:1:1), 0,66; (D) 1- butano! : piridin : ecetsav : víz (15:10: 3:12), 0,65. Az r-minosav analízis eredménye: Ser, 0,82; Pro, 1,09; Gly, 1,00; Leu, 1,01; Tyr, 1,05; Phe, 1,05; p-Cl-Phe, 0,97; T p, 1,82; Arg, 1,08. 7. példa N - A cetil - D - feniialanil -D -p - klór - feniialanil - D- triptofil - L - szeril - L - tirozil - D - triptofil - L - leucil- L-arginii-L-prolil-glicinamid, (Ac-D-Phe', D-p-G-Phe2, D-Trp3'e j-LH-RH acetát sójának előállítása A 2. példában leírt gyantáról (0,73 g) a védő csoportokat (az N-acetil-félék kivételével) és a hordozó gyantát (a kötő;soporttal együtt) a 6. példában leírt feltételek mellett távolítjuk el. A nyers peptidet a 6. példa szerinti oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, azzal a különbséggel, hogy a szilikagélt most l-butanol:ecetsav:víz 6:1:1 arányú elegyével eluáljuk. A liofilizált peptidet, azaz a cím szerinti vegyületet fehér, pelyhes por alakjában kapjuk neg (66 mg). Szilikagélen történt vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatnál a termék homogénnek bizonyult. A vékonyréteg kromatográfiát 4 oldószer rendszerrel a 6. példa szerint végeztük. A következő Rf értékek adódtak: (A) 0,63; (B) 0,28; (C) 0,71; (D) 0,67. Az aninosav analízis eredménye: Ser, 0,85; Pro, 1,03; Gly, 0,99; Leu 1,00; Tyr, 1,02; Phe, 1,01; p-Cl-Phe, 0,96, Trp, 1,83; Arg, 0,98. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
