185419. lajstromszámú szabadalom • Eljárás halogénezett szteroidszármazékok előállítására
1 135 419 2 13. Példa 11. Példa a) A hidroxilcsoport bevitelére alkalmas mikroorganizmus-készítmény előállítása.. 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban lévő 100 ml steril tápoldatot (amely 1 súly % élesztőkivonatot továbbá 2 súly % szacharózt tartalmaz és a pH-ja = 5,6) beoltunk a Curvularia lunata ATCC 12017 törzs ferdeagar-tenyészetével és az oldatot ezután 36 órán át 28°-on 120 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. Az így kapott tenyészoldat 5 ml-jével beoltunk 100 ml steril tápoldatot (ami a száraz anyagra számítva 0,75 % kukoricalekvárt (Cornsteep liquor”), továbbá 2 súly % szacharózt tartalmaz és a pH-ja = 5,5) és azt a fenti körülmények között 24 órán át tenyésztjük. A kifejlődött micéliumot centrifugáiás útján elválasztjuk, majd az eredetivel azonos térfogatú, de 0,7 súly % nátrium-szulfátot és 0,02 súly % Tween 80®-at (a Polysorbat 80 kereskedelmi neve) tartalmazó oldatban szuszpendáljuk, centrifugálással ismét elválasztjuk és az utóbb említett összetételű oldatban (az eredetihez képest fél térfogatnyi mennyiségben) újra szuszpendáljuk. b) Átalakítás és elkülönítés. 10 mg szteroidvegyület pro 1 ml oldat aránynak megfelelően mikrokristályos 21-klór-6a-fluor-17a-hidroxi-16)3-metil-pregn-4-én-3,20-dion-propionátot szuszpendálunk az előbbiekben ismertetett nátriumszulfát-Tween 80- oldatban. 40 térfogatrész micéliumszuszpenziót [lásd: a)] 1 térfogatrész szteroidszuszpenzióval elegyítünk és ezt Erlenmeyer-lombikban 48—96 órán át 28°-on rázogatjuk 250 fordulat/perc sebességgel. A kapott tenyészetet ezután több ízben etil-acetáttal extraháljuk, a nyers kivonatokat bepároljuk és a maradékot preparatív vékonyréteg-kromatográfiával [szilikagél; toluol-aceton (8:2) elegy] elválasztjuk. Éterből történő átoldás után 38—59 %-os kitermeléssel 2l-kl0r-6a-fluor-llß,17a-dihidroxi-16/3-metil-pregn-4-én-3,20-dion-17-propionátot kapunk, 15—28 % regenerált kiindulási anyag mellett. A termék fizikai állandói: 360 MHz-NMR-spektrum (CDC13) : l(s)~CH3(18); 1,18 (t,J=8,l Hz) - COCU2Cíh ; 1,39 (d,J = 8 Hz-CHj (16) ; 1,44 (s) —CH3(19) ; 3,95 + 4,05 (d,J = 12 Hz) -CH2Cl ; 4,5 (m) -H(ll) ; 5,1 - 5,4 (m) - H(6) ; 6,04 (s) — H(4) [ppm] ; olvadáspont: 214-214,5°. 12. Példa 200 mg 21-kIór-6a-fluor-l lß,17a-dihidroxi-16ß-metil-pregn4-én-3,20-dion-17-propionátot és 250 mg 2,3-diklór-5,6-díciano-l,4-benzokinont 8 ml dioxánban 22,5 órán át forralunk, visszafolyatás közben. A reakcióelegyet ezután lehűtjük és 50 ml 5 vegyes %-os (súly/térfogat) vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldaítal elegyítjük, majd 30 percig keverjük és metilén-dikloríddal extraháljuk. A szerves fázist lúg nátrium-klorid-oldattal mossuk, szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A kapott maradékot szilikagél-lemezen végzett vékonyréteg-kromatográfiával szétválasztjuk, 4:1 arányú toluol-aceton-rendszerben. A kapott 21-kl0r-6a-fluor-llß,17a-dihidroxi-16j3-metil-pregna-1,4-dién-3,20-dion -17-propionátot metilén-diklorid — metanol — éter-elegyből átoldjuk, az anyag olvadáspontja: 221-222° (bomlás közben). A kitermelés 80—85 %-os. A 12. Példában leírtakkal analóg módon 200 mg 21 - klór-6ú-fluor-í 7o-hidroxi-16í3-metil-pregn-4-én-3,20- -dion-propionátot (lásd a 10. Példát) 8 mi dioxánban 250 mg 2,3-diklór-5,6-diciano-l ,4-benzokinonnal kezelünk és a reakcióelegyet feldolgozzuk. Ily módon 21-klór-6a-fluor-17a-hidroxi-16ß-rnetilpregna-l ,4-dién-3,20dion-propíonátot kapunk, melynek olvadáspontja 216-219° (meíiléndiklond — éter-elegyből). A kitermelés 80— -85 %-os. 14. Példa Hatóanyagként 0,1 % 21-k!ór-6a-fluor-l lß,i7a-dihidroxi-16ß-metil-pregna-l ,4-dién-3,20-dion-l 7-propionátot tartalmazó kenőcsöt a következő előírás szerint állíthatunk elő: Összetétel (súly %-ban) 21 -Klór-6a-fluor-11/3,17a-dihidroxi-16ß-me til-pregna-i,4-dién-3,20-dion-17-propionát 0,1 % Vazelin 45,0% Paraffinolaj 19,6 % Cetíl-alkohol 5,0% Méhviasz 5,0% Szorbitán-szeszkvíoleát 5,0% p-Hidroxi-benzoesav izopropil-észtere 0,2 % Illatanyag 0,1 % Víz 20,0% A zsírjellegű anyagokat összeolvasztjuk az emulgeálószerrel. A konzerválószert vízben oldjuk és az oldatot a zsírjellegű anyagok olvadékába melegen beleemulgeáljuk. Kihűlés után a hatóanyagnak a zsíralap egy részével készített szuszpenzióját beledolgozzuk az emulzióba és ezt követően adjuk hozzá az illatanyagot. Analóg módon állíthatunk elő olyan kenőcsöt, amelynek hatóanyaga 0,1 % 21 -klór-6a-fluor-1 lß, 17a-dihidroxi-16P-metil-pregn-4-én-3,20-dion-17-propionát, illetve 03 % 21-klór-6a-fluor- 17a -hidroxi-lőd-metiI-pregn-4-én-3,2Q-dion-propionát vagy ennek 1,2-dehidroszármazéka. Az utóbbi két esetben a paraffinolaj mennyisége 19,4 %. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az A általános képletű halogénezett szteroidok előállítására — ebben a képletben X halogénatomot jelent, melynek atomszáma legfeljebb 17, Y hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, R jelentése legfeljebb 5 szénatomot tartalmazó alkilcsoport, az 1,2-helyzetben lévő szaggatott vonal pedig egy adott esetben jelenlévő további vegyértékkötést jelent — azzal jellemezve, hogy agy 3ß-hidroxi-16-metil-pregna-5,16-diön-20-onba, vagy annek 3-karbonsavészterébe egymást követő rövídszénáncű alkil-oxalátos vagy -formiátos, majd p-toluol-szulronsavazidos kezeléssel, bázisos hidrolízissel, S ezt kövemen egy HX általános képletű hidrogén-halogeniddel az X halogénatomot bevisszük a 21-helyzetbe, majd a kapott 21 -X-3ß-hidroxi 16-metil-pregna-5,16-díén-20-ont 5 10 v:> 20 20 30 35 40 45 50 55 60 65 10
