185416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin- vagy inzulin analógok előállítására
185416 Minta száma Glicin-puffer ml Egyesített oldat ml Valódi összes proteinkoncentráció 1 1,0 0,1 1,70 mg/ml 2 1,0 0,2 3,12 mg/ml 3 1,0 0,35 4,85 mg/ml 4 0,8 0,4 6,24 mg/ml 5 0,75 0,5 7,48 mg/ml 6 0,6 0,5 8,50 mg/ml 7 0,6 0,6 9,36 mg/ml 8 0,45 0,7 11,39 mg/ml 9 0,3 0,8 13,61 mg/ml 10 0,15 1,0 16,27 mg/ml 11 0 1,3 18,71 mg/ml A fenti minták HPLC-analízisét 22—25 órás reakció- bői megállapítható, hogy a lánc-egyesítési reakció során idő után végeztük el. A kitermelési adatokat a minták a valódi proteinkoncentráció optimuma 8 mg/ml körüli valódi proteintartalmából számítottuk. érték. Az eredményeket az alábbi táblázat ismerteti, mely-Minta száma Protein mg/ml Inzulir mg/ml Kapcsolás kitermelése % Legjobb kitermelés %-a 1 1,70 0,29 17,3 67,9 2 3,12 0,69 22,1 86,5 3 4,85 1,16 24,0 94,0 4 6,24 1,55 24,9 97,5 5 7,48 1,91 25,5 99,9 6 8,50 2,17 25,5 100 7 9,36 2,31 24,7 96,6 8 11,39 2,62 23,0 90,1 9 13,61 2,88 21,2 82,9 10 16,27 3,10 19,0 74,6 11 18,71 3,28 17,5 68,8 10. példa A következő példában az A- és B-lánc cisztein jelenlétében végzett kapcsolási reakciójának pH optimumát vizsgáljuk. 0,1 mól pH =10,5 értékű glicin-pufferral készített 10 ml A-lánc S-szulfonát (10 mg/ml) és 5 ml B-lánc S-szulfonát oldatot egyesítünk, majd hozzáadjuk 121,2 mg cisztein 3 ml glicin-pufferral készített, és 350 pl 5 n nátrium-hidroxid-oldattal 10,5 pH-értékre állított oldatát. A fenti oldat 1,4 ml-es mintáit szobahőmérsékleten, az alábbi táblázatban megadott kiindulási pH-értékre állítottuk. A cisztein-oldat 57 /rl-ének hozzáadása után 55 a pH-t azonnal a kiindulási pH-ra állítjuk. Ezután a mintákat 6 °C hőmérsékletű hűtőszobában helyezzük el, és 3 ml-es nyitott fiolákban egy éjszakán át rázatjuk. Az alábbi táblázat az egyes minták készítésének és kitermeléseinek jellemzőit adja meg: 6
