185324. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-karboxi-azaalkanoil-indolin- 2-karbonsav-származékok előállítására
1 185 324 2 5,0 g l-[(S)-alanil]-indolin-2(S)-karbonsavat és 4,3 g dietilamin 50 ml dimetilformamidban oldunk és 5,8 g 2-bróm-4-fenilbutánsav-etilészterrel elegyítünk. A reakcióelegyet egy éjszakán át 80 °C-on keverjük, majd bepároljuk. A maradékot 100 ml 0,5 n vizes nátriumhidroxid-oldattal felvesszük és kétszer 50—50 ml éterrel mossuk. A vizes réteget 100 ml metilén-kloriddal elegyítjük és a pH-értékét 12 n hidrogén-kloriddal 4,3-ra állítjuk be. A metilén-kloridos réteget kiöntjük. A vizes réteget kétszer 50—50 ml metilén-kloridban mossuk. Az egyesített metilén-kloridos mosóoldatokat vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. l-[N-(etoxi-karbonil-3-fenilpropil)-(S)-alanil]-indolin-2(S)-karbonsav. IR spektrum: 3210, 1745 és 1720 cm-1. [ajp = 103,4 °C (c = 0,6, etanolban). Ez utóbbi vegyület 0,6 g-ját 5 ml dietiléterben oldjuk és vízmentes hidrogén-kloridot vezetünk az oldathoz. A keletkezett csapadékot szűrjük, dietiléterrel mossuk és szárítjuk. A megfelelő hidrokloridot kapjuk, amely 175-180 °C-on olvad. 19. példa A találmány szerinti vegyületek kardiovaszkuláris hatása Az alábbiakban a találmány szerinti vegyületek angiotenzin-átalakító enzimre (angiotensin converting enzyme = ACE) mutatott gátló hatásának vizsgálatát ismertetjük. Az in vitro ACE-gátlás (ACE inhibition = = ACEI) biokémiai meghatározását e vegyületek nyúltüdő-szöveten mutatott aktivitásával jellemeztük. Az in vivo vizsgálat során először angiotenzin 1 (Al) adagolásával a vizsgálati állatban vérnyomásemelkedést idéztünk elő. Ezután az egyes vegyieteknek a vérnyomásemelkedést gátló hatását vizsgáltuk. I. Biokémiai vizsgálati módszer Az ACE Cheung és Cushmann [Biochim. Biophys. Acta, 293, 6762 (1975)] szerint készített nyúltüdőszövet preparátumot használtunk. A módszer során egy szintetikus szubsztrátból 30 perces, 37 °C hőmérsékleten végzett inkubálás során felszabadított hisztidil-lcucin mennyiségét spektrofotometriásán határoztuk meg. Az ACE-gátlás IC50-értékeit grafikusan határoztuk meg. Az IC50-érték az a koncentráció (mólban kifejezve), amelynek hatására a hatóanyag nélkül végzett kontrolihoz képest a felszabadult hisztidil-leucin mennyisége 50%-kal csökken. II. Az angiotenzin 1 (AI) által létrehozott vérnyomásemelkedés gátlása a vizsgált vegyületek intravénás adagolása mellett (%-os Al-gátlás) A kísérletekben az előzőekben leírtuk szerint, patkányok femorális artériájában, illetve az egyik lábikra vénájában egy-egy katétert helyeztünk el. Az artériás nyomást az artériában elhelyezett katéteren keresztül mértük, miközben az angiotenzin I-et és az egyes vizsgálandó vegyületeket a vénában elhelyezett katéteren keresztül adagoltuk. Az angiotenzin I által létrehozott vérnyomásemelkedés gátlását az alábbi táblázatban az egyes vegyületek különböző dózisainak adagolása utáni 30. percben kapott átlagértékkel jellemezzük. Olyan dózisértékeket alkalmaztunk, melyekből az IDso-érték átlagolható volt. A kísérletek eredményeit az alábbi táblázatban adjuk meg: Vegyület előállítási példa száma ln vitro ACEI Az AI által létrehozott vérnyomásnövekedés gátlása IC50 (m) iv. dózis (mg/kg) % AI gátlás 1. 6X10“9 0,1 80 6. 8X10-6 0.1 35 7. 3X10 8 1,0 80 4. 3X10 7 0,1 95 0.06 80 0,03 33 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás I általános képletű l-karboxi-(aza-alkanoilvagy aza-aralkunoi!)-indolin-2-karbonsav-származékok — mely képletben Ph jelentése szubsztituálatlan 1,2-feniléncsoport, vagy egy rövidszénláncú alkilcsoporttal, rövidszénláncú alkoxicsoporttal, hidroxilcsoporttal vagy halogénatommal helyettesített 1,2-fenilén-csoport; Rj jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú alkilcsoport, vagy amino-(rövidszénláncú)-alkilcsoport; R2 jelentése rövidszénláncú alkilcsoport vagy adott esetben a benzolgyűrűben halogénatommal helyettesített fenil-(rövidszénláncú)-alkil-csoport; valamint amidjaik és rövidszénláncú alkilésztereik, az indolin-2-karbonsav amidjának és rövidszénláncú alkilészterének kivételével, sói és diasztereoizomerei előállítására. azzal jellemezve, hogy a) egy III általános képletű Schiff-bázist - mely képletben p és q közül az egyik értéke 0, a másiké pedig 1 - vagy ennek valamely reakcióképes származékát hidrogénezzük; vagy b) egy IV általános képletű vegyületet vagy funkcionálisan átalakított származékát egy V általános képletű vegyület funkcionálisan átalakított reakcióképes származékával - ahol Ph és R2 jelentése a tárgyi kör szerinti, X jelentése hidrogénatom és I Y jelentése HOCO-CHR, -N-COOR0 általános képletű csoport, ahol R0 jelentése terc-butil- vagy benzilcsoport és Rí jelentése a tárgyi kör szerinti - kondenzálunk, és a fenti -COOR0 csoportot tartalmazó vegyületet hidrolizáljuk, vagy c) egy IV általános képletű vegyületet vagy funkcionálisan átalakított származékát egy V általános képletű vegyület funkcionálisan átalakított reakcióképes származékával - ahol 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
