185320. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin-származékok előállítására
1 185 320 2 készült oldatát. A reakcióelegyet eleinte enyhén hűtjük, majd 72 órán át szobahőmérsékleten keverjük, és ezután 4 órán át forraljuk. Lehűtés után hozzáadunk 80 ml etilalkoholt, az elegyet további fél órán át keverjük, majd 1 normál sósavra öntjük. A vizes elegyet etil-acetáttal kirázzuk, az etil-acetátos részt elválasztjuk, és vízzel, utána 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül megint vízzel mossuk, magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon 107 g olajos terméket kapunk. NMR-spektrum: 5 2,0 (acetil), 3,4—3,5 (metilén) és 7,1—7,5 (m-bróm-fenil). b) lépés DL-m-Bróm-fenilalanin 107 g (0,32 mól), az a) lépésben leírt módon kapott termék, 58,8 g (1,47 mól) nátrium-hidroxid és 220 ml víz elegyét 24 órán át forraljuk. Utána az elegyet szobahőmérsékletre hűtjük és pH-ját 6 normál sósavval 6,5-re állítjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk, ily módon 41,01 g (hozam: 53%) cím szerinti vegyületet kapunk. c) lépés Na-Trifluor-acetil-DL-m-bróm.-fenil-alanin 200 ml trifluor-ecetsavhoz hozzáadunk 46,53 g (0,19 mól) DL-m-bróm-fenil-alanint. Az elegyet 0 °C hőmérsékletre hűtjük, majd 5 perc alatt hozzáadunk 29,3 ml (0,21 mól) trifluor-ecetsav-anhidridet. Az elegyet másfél órán át 0 °C hőmérsékleten, majd 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, és utána az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 400 ml vízzel hígítjuk, a kapott csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk. A szilárd terméket dietil-éter és petroléter elegyéből átkristályosítva 28,4 g (hozam: 44%) cím szerinti vegyületet kapunk. Analízis a CuH9NO,BrF3 (340,1) képlet alapján: számított: C: 38.85%, 11:2,67%, N: 4,12%; talált: C: 39,09%, H:2,46%, N:4,32%. d) lépés L-m-Bróm-fenil-alanin 500 ml vízhez hozzáadunk 28 g (0,082 mól), a c) iépésben leírt módon kapott terméket. Az elegyhez keverés közben mindaddig adunk 2 normál nátriumhidroxid-oldatot, míg tiszta oldatot nem nyerünk (pH = 7,2). Ezután hozzáadunk 25 g karboxi-peptidáz A enzimet, és az elegyet 5 napon át enyhe keverés közben, termosztátban 37 °C hőmérsékleten és egy Radiometer gyártmányú pH-szabályozó segítségével pH = 7,2-n tartjuk. Utána az elegy pH-ját 5,0-ra állítjuk, szenezzük, és a szenet kiszűrjük. A szűrlet pH-ját 1 normál sósavval 3,0-ra állítjuk, és etil-acetáttal háromszor kirázzuk. Ezután a vizes oldat pH-ját 2 normál nátriumhidroxid-oldaital 7,0-ra állítjuk, majd csökkentett nyomáson addig löményítjiik, míg az L-izomer cl nem kezd kristályosodni. Ezután hagyjuk az elegyet szobahőmérsékletre hűlni, a csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 10,9 g (109%) cím szerinti vegyületet kapunk. 6 ej lépés Na-Tercier-butoxi-karbonil-L-m-bróm-fenil-alanin 25 ml tercier-butil-alkohol és 20 ml víz elegyéhez hozzáadunk 9,9 g (0,041 mól), a d) lépésben leírt módon kapott terméket, majd 20,5 ml (0,041 mól) 2 normál nátrium-hidroxid-oldatot és 8,9 g (0,041 mól) di-tercierbutil-karbonátot. A reakcióelegyet 5 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd hozzáadunk 150 ml vizet. A vizes elegyet dietil-éterrel kirázzuk, majd a vizes rész pH-ját hideg 1 normál sósavval 2,5-re állítjuk. Ezután dietil-éterrel megint kirázzuk, az utóbbi dietil-éteres részeket vízzel mossuk, magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékként kapott olajat feloldjuk petroléterben, és az oldatot éjszakán át 4 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált kristályokat kiszűrjük és megszárítjuk, ily módon 11,3 g (hozam: 80%) cím szerinti vegyületet kapunk, op.: 124-125 °C. [a]o = +16,7° (c = 1,0, et il-alkohol). Analízis a C]4H18N04Br (344) képlet alapján: számított: C:48,85%, H:5,27%, N:4,07%; talált: C: 49,25%, H:5,59%, N:4,04%. f) lépés Na-Tercier-butoxi-karbonil-L-m-bróm-fenil-alaninamid 50 ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 11,5 g (0,033 mól) N“-tercier-butoxi-karbonil-L-m-bróm-fenilalanint. Az elegyhez 15 °C hőmérsékleten hozzáadunk 3,63 ml (0,033 mól) N-metil-morfolint és 4,33 ml (0,33 mól) klórhangyasav-izobutil-észtert, majd az elegyet 5 percig -15 °C hőmérsékleten keveijük, Ezután 1 órán át vízmentes, gáz alakú ammóniát vezetünk az elegybe, és további 4 órán át —15 °C hőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet jég és 1 normál nátriumhidrogén-karbonát elegyére öntjük, és a vizes elegyet etil-acetáttal kirázzuk. A szerves részt először vízzel, utána 1,5 normál citromsav-oldattal, végül megint vízzel mossuk, magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A szilárd maradékot dietil-éterrel eldörzsöljük, a csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 11,3 g (hozam: 100%) cím szerinti vegyületet kapunk, op.: 146-147 °C. [a]p = +9,8° (c = 0,5, metil-alkohol). Analízis a C14Hi9N203Br (343,2) képlet alapján: számított: C: 48,99%, H:5,58%, N:8,16%; talált: C: 48,85 %, H:5,33%, N:7,91%. g) lépés L-m-Bróm-fenil-alanin-amid, sósavas sója 60 ml frissen készített 1 normál ecetsavas sósav-oldat és 5 ml anizol elegy éhez hozzáadunk 11,1 g (0,032 mól), az f) lépésben leírt módon kapott terméket. Az elegyet fél órán át szobahőmérsékleten keveijük, majd dietiléterbe öntjük, és a kivált csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 8,75 g (hozam: 98%) cím szerinti vegyületet kapunk. [a]p = +13,46° (c = 0,5, metil-alkohol). 5 IC 1C 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 65
