185302. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Digitális Lanata szívglikozidjainak a szétválasztására és egy vagy több komponens tiszta alakban történő kinyerésére
1 185 302 2 vízzel vagy valamely halogénezett alifás szénhidrogénnel készített 99 : 1-70 : 30, illetve 95 : 5-70 : 30 arányú elgyében oldva magnézium-szilikát oszlopra visszük vagy b) 1-4 szénatomos alifás alkohol és víz 99 : 1-70 : 30 arányú elegyében oldva poliamid oszlopra visszük, az oszlopról ugyanazzal az oldószerrel vagy oldószereleggyel eluáljuk, az egyes komponenseket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és kristályosítjuk. 1-4 szénatomos alifás alkoholként például méta-. nőit, etanolt vagy propánok, előnyösen metanolt és halogénezett alifás szénhidrogénként például kloroformot, metilénkloridot vagy széntetrakloridot, előnyösen kloroformot használunk. Ha az oldást és eluálást kizárólag alifás alkohollal végezzük, az előnyösen etanol. Az eljárás során a szorbens oszlopok a megadott oldószerek, illetve oldószerelegyek alkalmazása esetén a kiindulási anyagként alkalmazott glikozidkeverékekben jelen levő szennyezések nagy részét a felső harmadban megkötik, a szívglikozidokat pedig frakcionáltan átengedik. Minthogy a megadott oldószerek, illetve oldószerelegyek a szétválasztandó glikozidokat jól oldják, nagyobb mennyiségű glikozidkeverék vihető fel az oszlopra viszonylag kis oldószertérfogatban, így jó az oszlop felbontóképessége. Az összegyűjtött frakciókból a glikozidokat kinyerhetjük úgy, hogy a frakciókat térfogatuk ‘/e-Vfe-ára betöményitjük, ekkor a glikozidok nagy része, különösen a digoxin és a gitoxin kristályosán kiválik, és a kis mennyiségben jelen levő egyéb kísérő glikozidok oldatban maradnak. így tiszta termék állítható elő átkristályosítás nélkül. Ez különösen akkor valósítható meg, ha az eluálást alifás alkohol és víz elegyével végezzük. Eljárhatunk úgy is, hogy az összegyűjtött frakciókat bepároljuk és a glikozidokat ismert módon kristályosítjuk. A’találmány szerinti eljárás előnyei tehát az alábbiak. Nincs szükség többlépcsős elucióra, kicsi az oldószerfelhasználás, az oldószer regenerálható, az oszlop egymást követően regenerálás nélkül többször felhasználható és az eluensből a glikozidok közvetlenül kristályosíthatok. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük. 1. példa 4,0 g, 60% digoxint, 12% gitoxint és 28% más glikozidot, valamint egyéb kísérőanyagokat tartalmazó Digitalis lanata nyers glikozidkeveréket, amelyet a 149 778 számú magyar szabadalmi leírás alapján állítottunk elő, feloldunk 200 ml 90%-os vizes metanolban. Az oldatot 1500 ml 90%-os vizes metanolban szuszpendált 450 g magnéziumtriszilikát oszlopra visszük. (Az oszlop méretei: hosszúsága 400 mm, átmérője 75 mm.) A frakcionálási 90%os vizes metanollal végezzük. A frakciók összetételét szilikagélen rétegkromatográfiásan vizsgáljuk. (Futtató elegy: 90 : 14 : 0,5 arányú diklórmetánmetanol-ecetsav, előhívó: 20%-os vizes o-foszforsav oldat, 125 °C, 10 perc.) 1500 ml 90%-os vizes metanol eluciója után digoxint tartalmazó frakciók jelentkeznek. 400 ml-ben a digoxin zöme lejön az oszlopról (A frakció), további 125 ml-ben kevés gitoxinnal együtt kapjuk a maradék digoxint (B frakció), majd 380 ml-ben kapjuk a gitoxin fő tömegét (C frakció). Újabb 400 ml 90%-os vizes metanollal már csak kis mennyiségű anyag eluálódott (D frakció), és további 500 ml 90%-os vizes metanollal való eluálás után az oszlop újra felhasználható frakcionálásra. Az egyes összegyűjtött frakciókat 50 °C-on gyorsbepárlón (körülbelül térfogatuk f/s-ára) bepároljuk, amíg a kristálykiválás meg nem indul. A lehűlt oldatból a kivált kristályokat leszűrjük, és kis mennyiségű hideg, 1 : 1 arányú metanol-víz elegygyel mossuk. így az egyes frakciókból az alábbi anyagokat kapjuk. A frakció: 2,0 g digoxin, B frakció: 0,4 g digoxin, C frakció: 0,6 g gitoxin, D frakció: 0,2 g anyag, amely kísérő glikozidokból és bomlástermékekből áll. A bepárlás során kapott metanol fajsúly beállítás után teljes egészében felhasználható további frakcior.álásra. 2. példa Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban a nyers glikozidkeveréket 100 ml 90%-os vizes metanolban oldjuk, és az oldatot 1000 ml 90%-os vizes metanolban szuszpendált 250 g Polyamid 11 oszlopja visszük fel. Az eluálást szintén 90%-os vizes metanollal végezzük. Ily módon 0,97 g 95% tisztaságú digoxint kapunk (kitermelés: 85%), amely 240-255 °C-on bomíás közben olvad, valamint 0,3 g kromatográfiásan tiszta gitoxint, amelynek olvadáspontja 284-285 °C. 3. példa 70 g, 60% digoxint, 10% gitoxint és 30% más glikozidot, valamint egyéb kísérőanyagokat tartalmazó Digitalis lanata nyers glikozidkeveréket, amilyet a 149 778 számú magyar szabadalmi leírás alapján állítottunk elő, feloldunk 200 ml 9: 1 arányú metanol-kloroform elegyben, és az oldatot 150 3 ml 9 : 1 arányú metanol-kloroform elegyben szuszpendált 450 g magnéziumtriszilikát oszlopra visszük. (Az oszlop méretei: hosszúsága 110 mm, átmérője 110 mm.) Az eluálást 9 : 1 arányú metanol-kloroform eleggyel végezzük, a frakciókat az i. példában leírt módon vizsgáljuk. Az összegyűjtött, bepárolt frakciók kristályosítását a 151 897 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett módon végezzük. Ily módon az A frakcióból 3 g, 97% tisztaságú digoxint (olvadáspont: 245-260 °C), a B f akcióból 1,2 g 80% tisztaságú digoxint .és a C frakcióból 1,1 g kromatográfiásan tiszta gitoxint kapunk. Digoxin kitermelés: 71%. 4. példa 4 g, 30% A lanatozidot, 10% B lanatozidot, 40% C lanatozidot és 20% egyéb anyagot tartalmazó 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
