185263. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az immunszabályozást befolyásoló, TP5-analóg peptidek előállítására
1 185 263 2 formamidban oldjuk, az oldat pH-értékét trielilaminnal 8-ra állítjuk és 3,3 g (7 mmól) Z-Arg(N02)OPfp-t adunk hozzá. A reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, miközben az oldat pH-értékét trietil-aminnal 8-on tartjuk. Ezután az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml etanollal eldörzsölve szűrjük és kétszer 10 ml etanollal mossuk. így 3,85 g védett tetrapeptidet kapunk (73%) összhozam a kiindulási Boc-Aso(OBzI)-OPfpre számítva. Olvadáspontja: 135-148 °C, Rf = 0,80. 2. példa (B módszer) Z-A rg(N 02)- Lys(Z)-Asp(0 Bzl)-0 Bzl 1,62 g (3,3 mmól) Boc-Lys(Z)-OPfp, 1,40 g (4,0 mmól) Asp(OBzl)-OBzi. HC1 és 0,98 ml (7,0 mmól) trietil-amin elegyét 10 ml etil-acetátban szobahőmérsékleten egy óra hosszat állni hagyjuk, majd a reakcióelegyet 20 ml etil-acetáttal hígítjuk, 10-10 ml n sósavoldattal és 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, az oldószert vákuumban bepároljuk, a maradékot n-hexánnal megszilárdítva szűrjük és n-hexánnal mossuk. A kapott védett dipeptidet (termelés: 81,2%; olvadáspont: 92-95 °C; Rr = 0,75) 30 ml 4 n sósavas dioxánnal kezeljük és 30 perc múlva az oldatot szárazra pároljuk. A szabad dipeptidet (R^ = 0,10) 10 ml dimetil-formamidban oldjuk, az oldatot 0,35 ml trietil-aminnal semlegesítjük, majd a kapott szuszpenziót az alábbi módon készített vegyes anhidridhez adagoljuk: 10,6 g (3,0 mmól) Z-Arg(N02)-OH és 0,42 ml (3,0 mmól) trietil-amin 5 ml dimetil-formamidban készült oldatát -10 °C-ra hűtjük, és az oldathoz ezen a hőmérsékleten 0,36 ml (3,0 mmól) pivaloil-kloridot csöpögtetünk. Az így kapott vegyes anhidrid oldatához 5 perc múlva kezdjük adagolni -10 °C- on a szabad dipeptid oldatát. A reakcióelegyet további 30 percen keresztül 0°C-on keverjük, éjjelen át állni hagyjuk, majd másnap szárazra pároljuk. A maradékot 50 ml kloroformban oldjuk, 10—10 ml n sósavoldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel kirázzuk. A szerves fázist szárítás után szárazra pároljuk, és a kapott maradékot éter-n-hexán 1 : 1 arányú elegyével megszilárdítjuk, így 1,82 g (84%) védett tripeptidet kapunk, Rr = 0,70. 3. példa ( C módszer) Z-Arg(NQ2)-Lys(Z)-Asu-Val-OH 2,51 g (12 mmól) Val-O'Bu. HCl-ot 50 mi kloroformban oldunk, majd 3,86 g (10 mmól) Boc- Asp(0'Bu)-OSu-t és 1,68 ml ( 12 mmól) trietil-amint adunk hozzá. Másnap az oldatot 10-10 ml n sósavoldattal és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátoldattal háromszor kirázzuk. Szárítás után az oldószert bepároljuk, és a maradékként kapott védett dipeptidet (Rf = 0,80) 30 ml 5 n hidrogén-bromid ecetsavas oldatában egy hétig állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet szárazra pároljuk és a maradékot vízmentes éterrel megszilárdítjuk. így 2,65 g (98,2%) H-Asu-Val-OH. HBr-ot kapunk (Rf = 0,15), amelyet az 1. példában leírt módon acilezünk tovább. A védett tetrapeptid adatai az 5. táblázatban találhatók. 4. példa H-Arg-Lys-Asp-Val-OH 2,25 g (2,22 mmól) Z-ArgCNo^-Lys^)Asp(OBzl)-Val-ONB-t (1. példa) 50 ml 90%-os ecetsavban szuszpendálunk, majd hozzáadunk 1 g 5%-os palládiumos aktívszén-katalizátort, és 14 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át az elegyen. Ezután a katalizátort kiszűrjük, kétszer 10 ml 90%-os ecetsavval mossuk és a szürletet szárazra pároljuk. A maradékot vízzel és etanollal újból bepároljuk, majd 2 ml vízben oldjuk, és 30 ml etanolt adunk hozzá. A kapott szuszpenziót szűrjük és a csapadékot etanollal mossuk. így 0,92 g (80%) szabad tetrapeptid-monoacetátot kapunk. Aminosavanalízis: Lys: 1,05 (1,00), Arg: 0,95 (1,00), Asp: 1,04 (1,00), Val: 0,95 (1,00), [oí]p=-24,8° (o = 1,0; 10%-os ecetsavban), R* = 0,10. 5. példa L-Arginil-L-lizil-L-aszparagínsav-citrát 1,0 g (2,1 mmól) Arg-Lys-Asp-acetátot 15 ml vízben oldunk és citrát-ciklusba vitt Dowex 2x8 gyantával ioncseréljük. A gyantás szuszpenziót szűrjük, a szürletet vákuumban bepároljuk, a maradékot etanollal megszilárdítjuk, majd a csapadékot leszűrjük és etanollal alaposan mossuk, 0,98 g (97%) Arg-Lys-Asp-citrátot kapunk; op.: 83—86 °C (bomlik). [ot]p = + 6,75 (c = 1, 10%-os vizes ecetsav). 6. példa L-Arginil-L-iizil-L-aszparagil-L-valin-citrát 1,0 g (1,75 mmól) Arg-Lys-Asp-Val-acetátot 15 ml vízben oldunk és citrát-ciklusba vitt Dowex 2x8 gyantával ioncseréljük. A gyantás szuszpenziót szűrjük, a szürletet vákuumban bepároljuk, a maradékot etanollal megszilárdítjuk, majd a csapadékot leszűrjük és etanollal alaposan mossuk. 0,92 g (91%) Arg-Lys-Asp-Val-citrátot kapunk; op.: 112-115 °C (bomlik). [ag = - 15,74 (c=l, 10%-os vizes ecetsav). A fenti 1-3. példában leírt A, B, illetőleg C módszerrel, a megfelelő kiindulási anyagok ekvimoláris mennyiségének felhasználásával az alábbi 5. és 6. táblázatban ismertetett további hasonló vegyületeket állítottuk elő. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
