185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására

1

185 238

2

Op. 58-59 °C.

Elemi cmalízis a C|,HI503SC1 képlel alapján: számított:

C 50,28% H 5,75% S 12,21% Cl 13,50% talált:

C 50,52% H 5,56% S 11,92% Cl 13,42%

(3) Z-Arg(Tmo)-OH.CHA szintézise 6 ml 4 n nátriumhidroxid-oldat és 25 ml acélon elegyében feloldunk 1,85 g Z-Arg-OH-t és az oldatot jéggel hütjük. Ezután 2,50 g 4-metoxi-2,3.5,6- tetrametilbenzolszulfonilklorid 100 ml acelonos oldatát adjuk az oldathoz és az elegyet 1 óra hosszat keverjük. Ezután vizes citromsavat adunk az elegyhezés az oldószert ledesztilláljuk, a kívánt terméket elilaceláltal extraháljuk és vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az oldószert ledesztilláljuk és 0,58 ml ciklohexilamint adunk a maradékhoz. A keletkező terméket éterből kikristályosítjuk, szűrjük és szárítjuk.

Kitermelés 2,40 g, az elméleti hozam 63,1%-a. Op. 127-129 °C.

[ujj,1+ 5,9° (c = 0,84, metanol).

Elemi analízis a C3, H4707N5S képlet alapján: számítolt:

C 58,74% H 7,48% N 11,05% S 5,06% talált:

C 58,84%; H 7,30%, N 11,25% S 5,06%;

(4) H-Arg(Tmo)-ÓH szintézise 40 ml edlacetátban 2,0 g Z-Arg(Tmo)-OH.CHA-t szuszpendálunk és ezt követően a szuszpenzióhoz hozzáadunk 4 ml 1 n kénsavat. Azelegyet alaposan rázzuk, vízzel mossuk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot 40 ml metanolban oldjuk és a katalitikus redukciót palládiumkorom-katalizátor jelenlétében végezzük. Ezután a katalizátort szűréssel elkülönítjük és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékhoz étert adunk és a keletkező port szűréssel összegyűjtjük, majd szárítjuk.

Kitermelés 1,20 g (92,7%).

Op. 150-153 °C.

[a]fj — 4,5° (c = 0,92, metanol).

Elemi analízis a CI7H2805N4S ■ Vi H20 képlet alapján: számított:

C 49,86% H 7,14% N 13,68% S 7,83%, talált:

C 50,38% H 7,57%; N 13,48% S 7,60%;

Kísérleti példa

Körülbelül 20-20 mg Nn-védelt arginint feloldunk 2-2 ml trilluorecelsav és tioanizol 9 : 1 arányú elegyében és az oldatot 50 °C-on 1 vagy 4 óra hosszat állni hagyjuk. Az oldat 100-100 pl adagjait 10 ml-re egészítjük ki és megvizsgáljuk argininra. Az eredményeket a 2. táblázat mutatja.

2. táblázat

Hömér-Idő

Arg

séklet

(óra)

kiterme(°C)

lés (%)

H-Arg(Pme)-OH

50

1

64

4

89

H-Arg(Tms)-OH

50

1

90

4

91

H-Arg(Tmo)-OH

50

1

30

4

81

21. példa

(1) Boc-Tyr-Arg(Pme)-OH szintézise

20 ml telrahidrofuránban feloldunk 790 mg HArg(Pme)-OH-t. Ezután 0,34 ml trietilamint, valamint 0,57 Boc-Tyr-OH-ból, 0,40 g HONB-ből és 0,50 g DCC-ből készített Boc-Tyr-ONB-t adunk az oldathoz, majd lehűlés után az elegyet 15 óra hoszszat keverjük szobahőmérsékleten. Az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot citromsavval megsavanyíljuk és elilaceláltal extraháljuk. Az elilacetátos réteget vízzel mossuk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot kloroformban oldjuk és egy 4 x 6 cm nagyságú szilikagél-oszlopon kromatografáljuk. Az eluálásl 5%-os MeOH/CHCl3-eleggyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, betöményítjük és éterből kicsapjuk, majd a keletkező port szűréssel elkülönítjük.

Kitermelés 690 mg, az elméleti hozam 51,8%;-a. Op. 136-139 °C.

[«%- 15,0° (c = 0,5, dimetiiformamid).

Elemi analízis a C31H45Ö8N5S • H20 képiét alapján:

számított:

C 55,92% H 7,12% N 10,52% S 4,82% talált:

C 55,95%, H 7,02%, N 10,58%; S 4,62%

(2) H-Tyr-Arg-OH (Kyotorphin) szintézise

5 ml 9 : 1 arányú trifluorecetsav/lioanizol-elegyben feloldunk 300 mg Boc-Tyr-Arg(Pme)-OH-t és az elegyet 4 óra hosszat 50 °C-on állni hagyjuk. A triíluorecetsavat ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük. A csapadékot kis mennyiségű vízben oldjuk, egy 1 x 10 cm méretű oszlopon, amely Amberíile IRA-410 (acetát-forma) van töltve, átengedjük és liolilizáljuk. A liofilizátumot kis mennyiségű vízben oldjuk, 2,2 x 8 cm méretű karboximetil-cellulóz oszlopon kromatografáljuk és eluáljuk, amelyhez 300 ml vizet és 300 ml 0,1 mólos ammóniumacetálot használunk. A 110-155 ml frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk.

Kitermelés 135 mg.

[u]%- 17,8° (c = 0,5, H20);

Aminosav-analízis (savas hidrolízis): Arg 1,00(1), Tyr 0,92(1); Átlagos kihozatal 88,7%.

A kívánt vegyületet úgy is előállíthatjuk, hogy Arg(Tms) vagy Arg(Tmo) vegyületet használunk Arg(Pme) helyett. A védőcsoportnak 9 : 1 arányú trilluorecetsav-lioanizol eleggyel való eltávolítását a végső lépésben az Arg(Tms) esetében 50 °C-on 90

5

10

15

20

25

30

35

40

4b

50

55

60

10