185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
185 238 2 H-Thr-Lys-Pro-Arg-OH (Tuftsin) szintézise 0,5 ml tioanizol és 10 ml trifluorecetsav elegyében feloldunk 300 mg Boc-Thr-Lys(Boc)-Pro- Arg(MDS)-OH-t és az oldatot I óra hosszat 50 °C-on állni hagyjuk, majd a trifluorecetsaval csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot éterrel kezeljük és a keletkező csapadékot szűréssel elkülönítjük, szárítjuk és kis mennyiségű vízben oldjuk. Az oldatot 10 ml Amberlile ÍRA-410- ben (acetál-forma) 30 percig rázzuk. A gyantát szűréssel elkülönítjük és a szürletet liofilizáljuk. A porszerü liofilizátumot kis mennyiségű vízben oldjuk és az oldatot 1,5 x 10 cm méretű karboximetilcellulózoszlopra visszük. Azeluálást lineáris fokozatosság módszerével végezzük, 300 ml vizet és 300 ml 0,2 n ammóniumacetál-oldatot (pH = 6,9) használunk erre a célra. A fő frakciókat (290-350 ml) összegyűjtjük és liofitizáljuk. A keletkező port 1 n ecetsav-oldatban oldjuk és az oldatot 2,5 x 120 cm méretű Sephadex LH-20 oszlopra visszük, az eluálásta fenti oldószerrendszerrel végezzük. A fő frakciókat (270-310 ml) összegyűjtjük és liofilizáljuk. Kitermelés 180 mg. Optikai forgatóképesség [ctjjy’-óő,!0 (c = 0,6 5%-os ecetsav). TLC: RÍ3 = 0,22 (Aviccl) Aminosavanalízis (acidolízis): Lys, 1,00(1); Arg, 1,02(1); Thr, 1,01(1); Pro, 0,97(1); Átlagos kihozatal 92,0%. 15. példa 16. példa Boc-Tyr-Arg(MDS)-OH szintézise 30 ml dimetilformamidban feloldunk 1,91 a (0,005 mól) H-Arg(MDS)-OH-t. Az oldathoz hozzáadunk 0,7 ml (0,005 mól) trietiiamint és lehűlés után 1,89 g (0.005 mól) Boc-Tyr-OSu-t. Az clegyet szobahőmérsékleten 12 óra hosszal keverjük. Ezután 5 ml ecetsavat adunk az elegyhez és a dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és az etilacetátos réteget vízzel kétszer mossuk, majd az elilacetálol csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot éterrel kezeljük és a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, majd etilacetát/éter elegyből ismét kicsapjuk. Kitermelés 2,70 g, az elméleti hozam 84,9%-a. Op. 85-90 °C. Optikai forgatóképesség [ujj, + 0,6° (c = 0,5, dimetilformamid); TLC: Rf, - 0,14 Elemi analízis a C29H4109N5S képlet alapján: számított: C 54,79% H 6,50% N 11,02% S 5,04% talált: C 54,94% H 7,01% N 10,66% S 4,54% 17. példa H-Tyr-Arg-OH (Kyotorphin) szintézise 0,5 ml tioanizol és 10 ml trifluorecetsav elegyében feloldunk 300 mg Boc-Tyr-Arg(MDS)-OH-t és az oldatot 50-55 °C-on 1 óra hosszat állni hagyjuk. A trilluorecelsavat csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot éterre! kezeljük, a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük és kis mennyiségű vízben oldjuk. Az oldatot 10 ml Amberlite IRA-410-el (ecetsav-forma) 30 percig rázzuk. A gyantát szűréssel elkülönítjük és a szűrletet liofilizáljuk. A porszerü liofilizátumot kis mennyiségű vízben oldjuk és 1,5 x 10 cm méretű karboximetilcellulóz oszlopra visszük. Az eluálást a lineáris fokozatosság módszerével végezzük, amelyhez 300 ml vizet és 300 ml 6,9 pH-jú 0,1 mólos ammóniumacetát-oldatot használunk. A fő frakciókat (100-150 ml) összegyűjtjük és liofilizáljuk. A porszerű liofilizátumot kis mennyiségű 1 n ecetsavban oldjuk. Az oldatot 2,5x120 cm méretű oszlopra visszük, amelynek a töltete Sephadex LH-20 és az eluálást a fenti oldószer-rendszerrel végezzük. A fő frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. Kitermelés 150 mg. Optikai forgatóképesség [a]o'-17,6° (c = 0,4, víz). TLC: Rf3 = 0,45 (Avicel). Aminosav-analízis (acidilízis): Arg, 1,06(1); Tyr, 0,94(1); Átlagos kihozatal, 90.6%. 1. hivatkozási példa Penlametilbenzolszulfonilklorid szintézise 500 ml diklórmetánban feloldunk 17,8 g pentametilbenzolt és az oldatot - 5 °C és - 10 °C közötti hőmérsékletre hütjük. Az oldathoz hozzácsepegtetjük 24 ml klórszulfonsav 400 ml diklórmetánnal készített oldatát és az elegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet jég/5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-elegybe öntjük, a szerves réteget vízzel mossuk és magnéziumszulfát felett szárítjuk. Az oldószert ledesztilláljuk és a visszamaradó kristályokat szűrön összegyűjtjük, majd n-hexánból átkristályosítjuk. Kitermelés 27,7 g, az elméleti hozam 93,5%-a. Op. 80-81 °C. Elemi analízis a C, |HI502SC1 képlet alapján: számított: C 53.54°„ H 6,13% S 13,00% Cl 14,37% talált: C 53.78% H 6,09% S 13,00% Cl 14,39% 2. hivatkozási példa 2,4,6-lrimctoxibenzolszulfonilklorid szintézise 500 ml diklórmetánban feloldunk 5,05 g 1,3,5- trimetoxibenzoll és az oldatot -5 °C és - 10 °C közötti hőmérsékletre hütjük. Az oldathoz cseppenként hozzáadjuk 6 ml klórszulfonsav 400 ml diklórmetánnal készített oldatát és az elegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután az I. hivatkozási példában megadott módon kezeljük. A keletkező terméket széntetrakloridból kikrislályosíljuk és szűréssel elkülönítjük. Kitermelés 610 mg, az elméleti hozam 6,3%-a. Op. 126 129 °C. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
