185184. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3béta, 7béta, 15alfa-trihidroxi-5-androsztén-17-on és 3,15 dipivalátjának előállítására
1 185 184 2 nítése után vagy azonnal, azaz a triói elkülönítése nélkül is elvégezhetjük. Ehhez az első esetben a trióit piridinben oldjuk és pivalinsavkloriddal valamely észterező katalizátor, így 4-dimetilamino-piridin, jelenlétében észterezzük. A második esetben a triói piridinnel készített oldatát észterezzük, annak előzetes kinyerése nélkül. A reakciótermék feldolgozását a reakció befejeződése után szokásos módon, így például kicsapással, extrakcióval, átkristályosítással és/vagy kromatográfiás úton végezzük. A kiindulási anyag előállítása 2 literes Erlenmeyer-lombikban levő 500 ml 30 percen át 120 °C-on autoklávban sterilezett tápoldatot, amely 3,0 % dextróz-monohidrátot, 1,0 % Corn steep liquort, 0,2 % nátrium-nitrátot, 0,1 % kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,2 % dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,05 % magnézium-szulfát. 7H2 O-t, 0,002% vas([I)-szulfát. 7H20-t és 0,05 % kálíum-kloridot tartalmaz, a Colletotrichum lini (CBS 11221) törzs ferdecsöves tenyészetével beoltunk és 3 napig 30 °C-on egy forgó rázón 165 ford/perc sebességgel rázunk. A tenyészet 250 ml-ével 20 literes előfermentorban levő 15 liter olyan tápközeget oltunk be, amelyet 60 percen át 120 °C-on és 1,1 att nyomáson sterileztünk, és amelynek az összetétele azonos a tenyészet összetételével. A közeget szilikon alapú habzásgátló hozzáadása közben 29 °C-on és 0,7 att nyomáson, levegőztetés (15 liter/perc) és keverés (220/ford/perc) mellett 33 óra hosszat csíráztatjuk. Ez utóbbi tenyészet 0,9 literét steril körülmények között kivesszük és ezzel 20 literes főfermentort oltunk be, amelybe olyan fenti sterilezett tápközeget vittünk be, amely 1,0 % dextróz-monohidrátot, 1,0 % Corn steep liquort, 1,0 % szójaport, 0,2.% nátrium-nitrátot, 0,1 % kálium-hidrogén-foszfátot, 0,2 % dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,05 % magnézium-szu!fát.7H20-t, 0,002 % vas(II)-szulfát.7H20-t és 0,05 % kálium-kloridot tartalmaz. Az előfermentálás körülményei között 12 órán át tartó növekedési fázis után a közeghez 15 g 3j3-hidroxi-5- -androsztén-17-on 115 ml dimetilformamiddal készített sterilre szűrt oldatát adjuk hozzá, majd az egészet keverjük és levegőztetjük. A fermentáció lefolyását minták kivételével ellenőrizzük, amelyeket metilizobutílketonnal extrahálunk és vékonyrétegkromatográfiásan analizálunk. A reakció 24 órás kontaktidő után befejeződik. Ezt követően a táptalaj fele mennyiségének megfelelő metilizobutilketonnal, majd pedig egyharmadának megfelelő mennyiségű metilizobutilketonnal kétszer extraháljuk a fermentációs terméket, a kivonatokat egyesítjük és forgó bepárlóban körülbelül 1 literre betöményítjük. A koncentrátumot ezután rotációs bepárolón 50 C-os fürdőhőmérsékleten körülbelül 200 ml-re betöményítjük és éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk. A kivált kristályos anyagot szívatással elkülönítjük, kevés metilizobutilketonnal mossuk és 8 óra hosszat 80 °C-on vákuumszárítószekrényben szárítjuk. Ily módon 11,2 g 3ß,la, 15a-trihidroxi-5-androsztén-17-on-vegyületet kapunk, amely 214-215 °C-on olvad. Az anyahígot vákuumban szárazra pároljuk, az olajos kristályos maradékot a habzásgátló eltávolítása végett 100-100 ml hexánnal kétszer mossuk, metilizobut.ilketonban felvesszük és ebből kikristályosítjuk. Ily módon még 1,8 g kristályos anyagot kapunk, amelynek az olvadáspontja 208 210 °C. A kiindulási anyag előállítását úgy is végezhetjük, hegy a mikrobiológiai dihidroxilezéshez anyagként nem a 3(3-hidroxi-5-androsztén-17-ont használjuk, hanem a 3/3-acetoxi-5-androsztén-17-ont használjuk. Ebben az esetben a mikroorganizmus a hidroxilezés előtt még az acetátot is elszappanosítja. A fermentációs körülmények ezáltal nem változnak. Példák a találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek üzemi alkalmazására. A példa 160 g 7j3-hidroxi-15/3,16/3-metilén-3|3-pivaloiloxi-5-andj-osztén-17-on 1600 ml toluollal készített szuszpenziójához 80 °C-on 1,6 g vanádium(IV)oxid-acetil-acetonát hozzáadása után, 2 óra leforgása alatt hozzáadunk 160 ml 80 %-os terc-butil-hidroperoxid-oldatot, amelyet 475 ml toluollal készítettünk. Lehűlés után az oldatot vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Ily módon 171 g 5,6ß-epoxi-7ß-hidroxi-15(3, 16ß-mctildti-3ß-pivaloiloxi-5ß- androsztán -17-ont kapunk. Aceton/hexán-elegyből átkristályosítva 219— 2 20 °C-on olvad. [a]D = —12° (kloroform) B példa 169 g 5,6ß-epoxi-7ß-hidroxi-15ß,16ß-metil0n-3ß-pivaioiloxi-5ß-androsztan-17-on 340-340 ml diklórmetán, tetraklórmetán és pirídin elegyéhez hozzáadunk 200 g trifenilfoszfint és az egészet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióoldatot vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 310 ml etanollal felkeverjük és szűrjük. A szűrőpogácsát 175 ml etanollal mossuk és vákuumban szárítjuk. Ily módon 139,2g7a-kl0r-5,6ß-epoxi-15ß,16ß-metilén-3(l-pivaloiloxi-5/3-androsztán-17-ont kapunk. Aceton/hexán-elegyből átkristályosítva 227-228 C-on elvad. [a]D = 100° (kloroform). C példa 196 g 7a-kl0r-5,6ßepoxi-15ß,16ß-melildn-3ß-pivaIoilcxí-17-on 500 ml ecetsavval és 800 ml tetrahidrofuránral készített oldatához 70 °C-on 2 adagban 30 perces időközben hozzáadunk 392 g cinkport és az egészet ezen a hőmérsékleten 1 órán át keverjük. Az elegy lehűlése után a cinket Celite segítségével kiszűrjük és 5 liter metilénkloriddal mossuk. Az egyesített szűrletekhez 1,5 liter vizet adunk és szilárd nátriumhidrogénkarbonát hozzáadása útján keverés közben semlegesítjük. Ezt követően a szerves fázist vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban betöményítjük. A kapott szilárd anyagot etilacetáttal eldörzsöljük és így 134,7 g 5-hidroxi-15ß, 16/5-metilén -3ß- pivaloiloxi-5/3-androszt-6-én- 17-on-vegyületet kapunk. Op. 242-243 °C. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
