184991. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gentamicin C antibiotikum előállítására új micromonospóra törzzsel
11 184991 letkezett antibiotikumot a fermentléből ismert módon elkülönítjük. Kísérleteinkben az összes gentamicin antibiotikum aktivitását Bacillus subtilis ATCC 6633 törzzsel, agar diffúziós módszerrel határoztuk meg, és gentamicin C standardra vonatkoztattuk. A gentamicin C faktorok egymáshoz viszonyított arányát nagynyomású folyadék kromatográffal állapítottuk meg [M. Freeman és mtsai : J. Liquid Chromatography 2 (9), 1305—1317 (1979)]. A példákban bemutatjuk az új Micromonospora törzsek fermentációjának, a gyártási eljárásnak a részletéit, de ezzel nem kívánjuk korlátozni a találmány körét. 1. példa A Micromonospora purpurea ssp. luridus KGO (MNG 00210) jelzésű törzs mélyhűtve (—15 °C-on) tárolt vegetatív tenyészetével beoltjuk a következő összetételű inokulum táptalajt : szójaliszt 10 g kukoricakeményítő 10 g szacharóz 10 g kalcium karbonát 4 g pálmaolaj 3 g csapvíz 1000 ml pH=6,7—6,9 (150 ml-es Erlenmeyer-lombikban, 25 ml táptalaj). Az oltóanyag készítést 3 napig folytatjuk 35 °C-on rázóasztalon (400 fordulat/perc, 2,5 cm lökethossz). A kifejlődött tenyészetből (10%) beoltjuk a következő összetételű fermentációs táptalajt : szójaliszt 30 g kukoricakeményítő 50 g kalcium karbonát 7g ammóniumszulfát 3 g nátriumklorid 3 g kobaltklorid 0,8 mg pálmaolaj 5,0 g csapvíz 1000 ml pH=6,8—7,0 (150 ml-es Erlenmeyer-lombikban, 25— 25 ml táptalaj) és rázóasztalon tenyésztjük, 35 °C-on, 6 napig. A fermentáció befejezésekor a fermentlé összes gentamicin antibiotikum tartalma 1680 E/ml, mely az egyes géhtamicin-frakciók oszlik meg %-ösaft : között a következőképpen gentamicin Cla tartalom 24,6%, gentamicin C2 31,8%, gentamicin C2a 11,1%. gentamicin 32,5%. 2. példa A Micromonospora purpurea ssp. luridus KGO—35 (MNG—00209) jelzésű törzs mélyhűtve (—15 °C-on) tárolt vegetatív tenyészetével beoltjuk az 1. példa szerinti inokulum táptalajt, majd a 35 °C-on, rázóasztalon, 3" napos tenyésztés után kifejlődött oltóanyagot átoltjuk a következő összetételű fermentációs táptalajba : szójaliszt 35 g mogyoróliszt 10 g búzakeményítő 55 g kalciumkarbonát 7,5 g ammóniumszulfát 3 g nátriumklorid 3 g kobaltklorid 0,8 mg pálmaolaj 5 g csapvíz 1000 ml 5 pH = 6,8—7,0 (150 ml-es Erlenmeyer-lombikban, 25— 25 ml táptalaj). Beoltás után 35 °C-on, 6 napig, rázóasztalon tenyésztjük. A fermentáció befejezésekor a fermentlé összes gentamicin tartalma 1940 E/ml; %-os megoszlása : 10 gentamicin CIa 27,5%, gentamicin C2 30,6%, gentamicin C2a 9,2%, gentamicin C[ 32,7%. 15 3. példa A Micromonospora purpurea ssp. luridus KGO (MNG—00210) jelzésű törzs 1. példa szerint előállított 20 oltóanyagával (térfogat : 100 ml) beoltjuk a következő összetételű steril inokulum táptalajt (3 m3 térfogatú előfermenforban) ; szójaliszt 20 kg búz'akeményítő 20 kg 25 szacharóz 20 kg kalciumkarbonát 8 kg pálmaolaj 2 kg csapvíz 20001 pH= 6,7—6,9. Az üzemi oltóanyag előállításához 30 120 m3/ó levegőztetést alkalmazunk, a keverő fordulatszáma 220/perc; a hőmérsékletet 35 °C-on tartjuk. Az ily módon 72 óra alatt kifejlődött oltóanyagot beoltjuk egy csőfermentorba, mely 20 m3, a következő összetételű steril táptalajt tartalmazza; 35 szójaliszt 600 kg búzakeményítő 1 000 kg kalciumkarbonát 120 kg ammóniumszulfát 60 kg nátriumklorid 60 kg 40 kobaltklorid 16 g páímaolaj 120 kg csapvíz 20 0001 pH= 6,8—7,0. A fermentációt 35 °C-on folytatjuk le, a levegőztetés mértéke az első 12 órában 600 m3/óra, ez-45 után a fermentáció befejezéséig 1200 m3/óra. A fermentáció folyamán a 72. órában, majd a 96. órában 2000— 2000 1 steril vizet adagolunk a fermentléhez. A 6 napos fermentáció után a fermentlé táptalajra vonatkoztatott összes gentamicin-antibiotikum tartalma 1410 E/ml, 50 %-os megoszlása : gentamicin Cla 25,8%, gentamicin C2 32,8%, gentamicin C2a 10,1%, 55 gentamicin C, 31,3%. 4. példa A Micromonospora purpurea ssp. luridus KGO—35 60 (MNG—00209) jelű törzs 1. példa szerint előállított oltóanyagával (térfogat 100 ml) beoltjuk a következő összetételű steril inokulum táptalajt (50 1 térfogatú előfermentorban) ; szójaliszt 0,3 kg 65 kukoricakeményítő 0,45 kg 7
