184813. lajstromszámú szabadalom • Eljárás difoszfonát-származékok előállítására
1 2 18« 81? — trigüceridek; enzimes eljárás (ßoehringer Mannheim Kit 126 012); — foszfoiipidek; moiibdát/vanadát reakció (Beehringer Mannheim Kit 124 9 74); — /3-lipoproíemek: a koleszterint heparin — CaClj 5 kiespds után M, Burstein és munkatársai (La Presse Médicale, 43, 974 [ 1958j) és D. Watson (Clin. Chin. Acta, J, 637 [I960]) szerint. A kapott eredmények: J0 Normális és koleszterinnel kezelt patkányokon mérve, az 1 és 3 vegyidet kivételével az (I) általános képletű difoszfonátok csökkentették a szérum szabad zsírsavtartalmát. Úgy tűnik, hogy ez a hatás általánosan jellemző ezekre a — p-klór-fenil oldallánccal rendelkező — di- 15 íoszfonátokra, illetve ez rámutat a zsír-anyagcserében való szerepükre. Szamos hipclipidémiás szerre írtak le hasonló tulajdonságokat („Hypolipidemic Agents”, ed. David Kritchevsky, 41, Handbook of Experimental Pharmacology, Springer-Verlag, 349—408 [1975]). A 2, 20 4, 7, 8, 10 és 19 vegyületek, valamint a 4 vegyület sav formája esetében jelentős csökkenést mértünk a szérum t igliceridck mennyiségében. Számos esetben úgy találtuk, hogy a 2, 4, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 21 és 27 vegyületek növelik a szérum foszfoiipidek mennyiségét. Aktivitásban a 4 vegyület íealább kétszeresen felülmúlta a többit. A (3-lipoprotein frakcióban (nagyon kis sűrűségű lipoproteinek [VLDL=very low density lipoproteins] és kis sűrűségű lipoproteinek [LDL=low density lipoproteins])jeleníevő koleszterin mennyisége csökkent, míg az a-lipoprotein frakcióban (nagy sűrűségű lipoproteinek ’ ' [HDL=high density liopoproteins]) a koleszterin mennyisége növekedett, ami így az a-ko!eszterin/j3- -koleszterin arány kedvező növekedéséhez vezetett. Huzamosabb gyógykezelés során ezt a hatást a máj és az , aorta csökkent koleszterintartalma kísérte. Összeíráson- Utas céljából vizsgáltuk a klofibrátct, és a foszfoiipidek 33,6 %-os, valamint az arány 52,2 %-os csökkenését tapasztaltuk. Ezek az eredmények megegyeznek a C. E. Day és munkatársai fArtery, J, 90-109 [1979]) és K. R. Müller és G. G. Cortesi (Artery, 4, 564-577 [1978]) 40 által ismertetett eredményekkel, amelyek azt támasztották alá, hogy a klofihrát patkányokon vizsgálva csökkenti a HDL-koleszterin mennyiségét. A fent ismertetett eredmények azt mutatják, hogy ezek a difoszfonátok a zsír-anyagcserét befolyásoló 45 hatással rendelkeznek, ami különösen abban nyilvánul meg, hogy növelik az a-lipoproteinekben jelenlevő lipid (főképp koleszterin) mennyiségét, valamint csökkentik a 6-3ipoproteinekben jelenlevő lipidek (főképp trigliceridek) mennyiségét. Minthogy ismeretes az a tény, hogy a 50 HDL-koleszterin mennyisége fordított korrelációban áll a szív és érrendszeri megbetegedések veszélyével (lásd N. E. Müler, Lipids, 13, 914-919 [1978]), a HOL szintet tulajdonsággal rendelkező difoszfonátok hasznosaknak bizonyulnak az atherosclerosis kezelésben. 55 Fontos megjegyezni, hogy a 4 vegyület sav vagy só formája, valamint a meglehetősen egyszerű í difoszfonát vegyület nem rendelkezik ezekkel a tulajdonságokkal. Azt is fontos megjegyezni, hogy azok a difoszfonátok, amelyek szerkezetükben eltérnek a 2, 4, 7, és 8 vegyü- qq lététől, nem rendelkeznek a zsír-anyagcserét befolyásoló hatással. Ezzel kapcsolatban utalunk mások vizsgálataira: W. Hollander és munkatársai, Atherosclerosis, 31, 307- 325 (1978); és Mellies és munkatársai, Artery, 6, 38 (1979). 65 13. példa Az (I) általános képletű vegyületek koleszterinnel kezelt patkányokra gyakorolt hatásának vizsgálata Az alkalmazott módszer ismertetése: Abból a célból, hogy növeljük a koleszterin mennyiségét a szövetekben, különösen a májban, patkányokat magas zsír- és koleszterintartalmú diétán tartottuk 10 naptól 3 hónapig terjedő ideig. Az állatok a következő összetételt kapták: 20 % kazein, 37 % vaj, 9,1 % cellulóz, 18,9 % dextróz, 4,5 koleszterin, 1,8 % nátrium-kólát, 7,3 % ásványi anyag, 1 % vitamin és 0,4 % kolin. Ezt követően a patkányoknak normális eledelt adtunk, és 10 naptól 3 hónapig terjedő ideig különböző vegyüleíekkel kezeltük őket (200 mg/kg/nap). Mértük a fentiekben felsorolt szérum paramétereket. A máj és aorta lipideket J. Foich és munkatársai szerinti módszerrel extraháltuk (J. Biochem., 226, 497 [1957]). A lipidek összmennyiségét szulfo-foszfo-vanillines reakcióval (lásd N. Zölr.er és K. Kirsch, Z. Ges. exp. Med., 135, 545 [1962]), a koleszterin mennyiségét pedig a Liebermann-Burchard reakcióval határoztuk meg. A kapott eredmények: A fent ismertetett diéta 8-íO-szeresére növelte a lipidek, különösen a trigliceridek és a koleszterin összmennyiségét. A 2, 4, 7, 8, II, 12, 16 és 19 vegyületekkel való kezelés hatására a májban a lipidek összmennyisége és/vagy 2 májban a koleszterin mennyisége jelentősen csökkent. Ugyanezt az eredményt kaptuk az aorta szövetek vizsgálatával is. Ez azt mutatja, hogy a vizsgált difoszfonátok a szövetekben koleszterin-eltávolító hatással rendelkeznek. Minthogy közismert, hogy a koleszterin lerakódása fontos szerepet játszik az atherosclerosis kialakulásában és/vagy kifejlődésében, a koleszterinnek a szövetekben, így az aortában való lerakódásának megelőzésével ezek a vegyületek hasznosak lehetnek az atherosclerotikus megbetegedések kezelésében vagy megelőzésében. 14. példa Az (1) általános képletű vegyületek sav és só formáinak hiperkalcémiás patkányokra gyakorolt hatásának vizsgálata Az alkalmazott módszer ismertetése: Az utóbbi évek kutatási eredményei szerint a difoszfonsavak hiperkalcémiás állatokkal végzett kísérletekben hatásosak és inhibítálják az aorta és a vese elmeszesedését (lásd M. Potokar és M. Schmidt-Dunker, Atheroscle:osis, 30, 313-320 [1978]). Ezek a vegyületek még azzal a hatással is rendelkeznek, hogy megelőzik a plazma kalcium mennyiségének D-vitamin által elődézett növekedését. Ez a hatás hasznos lehet az előzőeg megállapított atherosclerosis visszafejlesztésében lásd I. Y. Rosenblum és munkatársai, Atherosclerosis, 22, 411-424 [1975]). Minthogy a difoszfonátok sav és mononátriumsó formában rendelkeznek ezekkel a tulajdonságokkal, a 4 vegyület sav és mononátriumsó formáit megvizsgáltuk. A vizsgálatokat a Potokar-féle módszerhez (lásd fent) hasonló módon végeztük el. Négy him Ms tar patkányból álló csoportnak a 4 vegyület sav vagy 9
